ソマトスタチン受容体の構造解析と発現調節機構、ならびに臨床的意義に関する研究

1993 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 04454565
• Research Institution: FIRST DEPARTMENT OF INTERNAL MEDICINE, SCHOOL OF MEDICINE, THE UNIVERSITY OF TOKUSHIMA
• Principal Investigator: 齋藤 史郎 徳島大学, 医学部・内科学第一講座, 教授 (40010368)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 横越 浩 徳島大学, 医学部・内科学第一講座, 助手 (00253203) ; 板東 浩 徳島大学, 医学部・附属病院・第一内科, 助手 (60228690)
• Keywords: ソマトスタチン受容体 / レセプターアッセイ / PCR-クローニング / 遺伝子発現 / 点変異

Research Abstract

ヒト胎盤膜より調製した膜分画より10mM-CHAPSを用いて受容体蛋白の可溶化を行った。標識ソマトスタチンと可溶化受容体のクロスリンクを行うと、SDS-PAGEでは複数のバンドを認め、ゲル濾過では660Kd以上の高分子として溶出された。次にヒト、ブタのソマトスタチン受容体遺伝子のPCRクローニングを行った。得られたプローブによるサザーンブロットで、ヒト1型受容体はEcoRIで20Kb,PstIで2.7Kb,BamHIで7Kbの一本のバンドを認め、ヒト2型受容体ではEcoRIで30Kb,PstIで11Kb,BamHIで30Kbの一本のバンドを認め、いずれもシングルコピー遺伝子と考えられた。ブタ遺伝子ライブラリーのスクリーニングにより得られたブタ2型受容体遺伝子は1107bpのopen reading frameをもち、369アミノ酸残基の蛋白をコードしていた。ブタ2型受容体は7カ所の疎水性領域を有し、7回膜貫通型のG蛋白共役受容体に属すと考えられ、この型の受容体に特徴的な第二細胞内ループのAsp-Arg-Tyr構造、Cys残基の配置ならびに糖鎖結合部位が認められた。受容体の発現の検討では、正常組織では1型受容体は胃、腸に、2型受容体は下垂体、大脳、リンパ球で高い発現を認めた。各種内分泌組織における検討ではバセドウ病甲状腺、甲状腺腺腫、甲状腺乳頭癌で2型受容体の強い発現を認め、甲状腺髄様癌、褐色細胞腫で1型受容体の強い発現を認めるなど、受容体のサブタイプの発現は個々の症例により相違が認められた。腫瘍におけるソマトスタチン受容体遺伝子変異をSSCPとTGGEを用いて調べた結果、甲状腺腺腫1例、腺腫様甲状腺腫1例、甲状腺乳頭癌2例、副甲状腺腺腫1例、ACTH産生細胞株1例に移動度の異なるバンドを認め、塩基配列を決定したところ、2型受容体のコドン188にミスセンス変異が同定された。

Research Products

• [Publications] 藤中雄一: "各種内分泌腫瘍におけるソマトスタチン受容体の発現" 日本内分泌学会雑誌. 69. 776 (1993)
• [Publications] 張辰宇: "各種内分泌腫瘍におけるソマトスタチン受容体遺伝子の解析" 日本内分泌学会雑誌. 69. 776 (1993)
• [Publications] Matumoto K: "Molecular cloning and sequencing of a porcine somatostatin receptor2." Biochem Biophys Res Comm. (in press).