血小板機能の発現とその異常症に関する分子生物学的研究

1993 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 04454570
• Research Institution: Kyoto University
• Principal Investigator: 大熊 稔 京都大学, 医学部, 教授 (50026986)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 高山 博 京都大学, 医学部, 助手 (10197220)
• Keywords: 血小板 / トロンボキサンA_2 / 受容体 / ミスセンス変異 / コラーゲン / 12-リポキシゲナーゼ / ICAM-2 / 機能異常

Research Abstract

1.トロンボキサンA_2(TXA_2)受容体異常症に関する研究:患者の血小板RNAよりRT-PCR法によってTXA_2受容体cDNAの塩基配列を決定し、細胞内第1ループにCGC(Arg)→CTC(Leu)のミスセンス変異を見いだした。ゲノムの解析より、患者はこの変異に関しホモ接合体であること、弟および子供がヘテロ接合体であることが判明し、本疾患は遺伝性疾患であると結論された。また、ヘテロ接合体の血小板においてもTXA_2に対する反応低下が認められた。
2.コラーゲン受容体(P62)に関する研究:正常人血小板の1%TritonX-100可溶化分画を原料に種々のクロマトグラフィーと調整的SDS-PAGEによってP62を部分精製した。N末端アミノ酸配列分析により、この部分精製P62にICAM-2が確認されたが、抗ICAM-2抗体を用いた解析では、正常血小板とP62欠損患者血小板上のICAM-2の発現量に有意な差を認めずICAM-2とP62との異同はこれまでのところ不明である。またこの粗P62分画を抗原として、抗P62モノクローナル抗体の作成を試みたが、P62を認識するクローンは確立できなかった。現在P62欠損患者血漿から分離した抗P62抗体によるイムノアフィニティクロマトグラフィーを用いた新たな精製法を検討中である。
3.12-リポキシゲナーゼ(12-LOX)欠損症に関する研究:12-LOXの酵素活性が完全欠損であるにもかかわらず酵素蛋白の存在する症例を発見し、12-リポキシゲナーゼ活性の制御機序の解明に新たな糸口を見いだした。現在この患者血小板について活性阻害因子の有無、酵素蛋白の局在、RNA定量等の解析を進めている。また巨核球系培養細胞においても12-LOX発現と活性の制御機序を検討するため、各種細胞でその基礎的検討を行なっている。

Research Products

• [Publications] Matsuda S: "Decreased messenger RNA of arachidonate 12-lipoxygenase in platelets of patients with myeloproliferative disorders." Biochimica et Biophysica Acta. 1180. 243-249 (1993)
• [Publications] Fuse I: "Defective signal transduction induced by thromboxane A_2 in a patient with a mild bleeding disorder:Impaired phospholipase C activation despite normal phospholipase A activation" Blood. 81. 994-1000 (1993)
• [Publications] Yamamoto S: "Biochemical and molecular biological approaches to two types of arachidonate 12-lipoxygenase" Journal of Lipid Mediators. 6. 69-73 (1993)
• [Publications] Ishibashi T: "Purification of p62,a putative platelet collagen receptor,and its functional role in platelet responses induced by wheat germ agglutinin." Journal of American Medical Association Southeast・Asia. 9(Suppl 2). 41-46 (1993)
• [Publications] Sugiyama T: "Functional roles in platelet-collagen interactions of the antigen recognized by an antiplatelet antibody specific for a putative collagen receptor." International Journal of Hematology. 58. 99-104 (1993)
• [Publications] Takayama H: "Involvement of GPIIb/III a on human platelets in phosphotyrosine-specific dephosphorylation" Biochemical and Biophysical Research Communications. 194. 472-477 (1993)
• [Publications] Yamamoto S: "Advances in Polyunsaturated Fatty Acid Research" Yasugi T,Nakamura H,Soma M, 6 (1993)
• [Publications] 大熊 稔: "別冊:医学のあゆみ:血液疾患-State of arts" 溝口 秀昭、平井 久丸、坂田 洋一, 3 (1993)