ヒトのサイトカインのレセプターの研究:GM-CSFおよびG-CSFを中心として

1992 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 04454572
• Research Institution: Kyushu University
• Principal Investigator: 仁保 喜之 九州大学, 医学部, 教授 (60091287)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 久保田 晃 九州大学, 医学部, 医員 ; 原田 直樹 九州大学, 医学部, 医員 ; 池松 渉 九州大学, 医学部, 医員 ; 下田 和哉 九州大学, 医学部, 医員 ; 岡村 精一 九州大学, 医学部, 講師 (20136435)
• Keywords: GM-CSF / G-CSF / レセプター / フローサイトメトリー / モノクローナル抗体 / RT-PCR / 刺激伝達 / ノーザン法

Research Abstract

蛍光標識リガンド給合能を指標にフローサイトメトリー(FCM)によりサイトカインレセプター分布の解析を行った。FCMでは従来のラジオレセプターアッセイ法に較べて解析対象を正確に同定できる利点が有り,臨床検体では特に有用であった.CD34抗原陽性細胞(幹細胞)にG-CSFレセプターが存在することをFCMで証明し,それらの細胞をセルソーターで取りだし,コロニー形成能およびコロニーを構成している細胞種類を確認した.また,骨髓性白血病だけでなく,混合型白血病におけるG-CSFレセプターの存在状態を明かにした.さらに,血小板にもG-CSFレセプターの存存および刺激伝達を試験管内および生体内で証明した.一方,幹細胞因子のレセプターであるc-kit遺伝子およびその遺伝子産物もノーザン法およびFCMで検出している.同一系統の細胞に対してもG-CSFの増殖と機能発現など様々な作用があり,レセプターの構造とレセプター後の刺激伝達とに差がある可能性があり,レセプター遺伝子の構造の差をPCR等で確認中である.
ヒトG-CSFレセプター,GM-CSFレセプターα鎖とβ鎖の3つの遺伝子を取りだして大量に増殖させた.これらを株細胞に導入して安定した変異株を作成中である.また,G-CSFレセプター分子とGM-CSFレセプター分子のオリゴペプチドを合成して家兎とマウスを免疫した.十分な活性を有すGM-CSFレセプター対するポリクローナル抗体(家兎,マウスとも)およびG-CSFレセプターに対するマウスポリクローナル抗体が作成でき,レセプターの検索に使用開始した.さらに,株体価が上昇したマウスからモノクローナル抗体を作成している.

Research Products

• [Publications] Shimoda Kazuya: "Granulocytecolony-stimulating factor receptors on human leukemia:Biphenotypic leukemic cells posesses G-CSF receptors." Cancer Research. 52. 3252-3255 (1992)
• [Publications] Kondo Seiji: "CD7-positive acute myeloid leukemia:Further evidence of cellular immaturity" Journal of Clinical and Experimental Oncology. 118. 386-388 (1992)
• [Publications] Omori Fusayuki: "Levels of human serum granulocyte colony-stimulating factor and granulocyte-macrophage colony-stimulating factor under pathological conditions." Biotherapy. 4. 147-153 (1992)
• [Publications] IKematsu Wataru: "Circulating CD34+ hematopoietic progenitors in the harvesting peripheral blood stem cells;Enhancement by recombinant human granulocyte colony-stimulating factor." Biotherapy. 5. 131-136 (1992)
• [Publications] Shimoda Kazuya: "Identification of a functional receptor for granulocyte colony-stimulating factor on platelets." Journal of Clinical Investigation.
• [Publications] Shimoda Kazuya: "Granulocyte colony-stimulating factor and platelet agregation." Lancet.
• [Publications] Shimoda Kazuya: "Detection of the granulocyte colony-stimulating factor receptor using biotinylated granulocyte colony-stimulating factor:Presence of granulocyte colony-stimulating factor receptor on CD34-positive cells." Research in Experimental Medicine. 192. 245-255 (1992)
• [Publications] Otsuka Takesi: "Long-term survival of human myeloid progenito cells induced by a mouse bone marrow stromal cell line." International Journal of Cell Cloning. 10. 153-160 (1992)
• [Publications] Tanaka Takesi: "Differentiation of rat myelomonocytic leukemia cell line(c-WRT-7)cells by rat preadipocyte cell line,REC A16 in vitro." Journal of Clinical and Experimental Oncology in press.
• [Publications] Shimoda Kazuya: "Serum G-CSF levels in umbilical cord blood of normal full-term neonates." Biomedicine and Pharmactherapy. 46. 337-341 (1992)
• [Publications] Harada Naoki: "Influence of a traditional Chinese herbal medicine,Ren-shen-yang-rong-tang(Japanese name:Ninjin-yoei-to) on production of interleukin-6 from peripheral blood mononuclear cells and bone marrow adherent cells." International Journal of Immunotherapy. 8. 141-145 (1992)
• [Publications] Shimoda Kazuya: "Human macrophage colony-stimulating factor levels in cerebrospinal fluid." Cytokine.