1993 Fiscal Year Annual Research Report
カルパイン-カルパスタチン系の個体・細胞レベルでの発生分子遺伝学的機能解析
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04454590
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| Research Institution | THE UNIVERSITY OF TOKYO |
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Principal Investigator |
榎森 康文 東京大学, 大学院・理学系研究科, 助教授 (60160389)
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| Keywords | カルパイン / カルパスタチン / プロテアーゼ / カルシウム / シグナル伝達 / ショウジョウバエ / 分子生物学 |
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| Research Abstract |
カルパインは、細胞内カルシウム濃度上昇によって活性化するフロテアーゼであり、カルシウム細胞内シグナル伝達系に位置する酵素と考えられているが、生理学的機能には不明の点が多い。本研究では、まず、ショウジョウバエの系を用いて生体内でのカルパインの機能を明かにするため、その特異的抗体を作製し、初期胚における細胞内分布とその変化を明かにした。その結果、カルパインは、発生ごく初期の多核期から細胞化する段階で、まず、極細胞の形成時にそれを裏打ちするように極在すること、次いで、細胞化の段階で核周期と共に存在様式が変化し、ある種のアクチン結合タンパク質と共に細胞骨格系と相互作用しながら存在し、最終的には、予定細胞膜領域に局在することが明らかになった。さらに、抗体注入実験から、カルパインは細胞化に重要な機能を持っていることを示唆する結果を得た。
次に、遺伝学的実験を行う開始段階として、唾腺染色体を用いた多糸染色体in situ ハイブリダイゼーション実験を行った結果明らかになった遺伝子座を基に、既知の発生変異体リストと照合して変異体のスクリーニングを行ったが、直接リンクするものは得られなかった。
さらに、カルパインの特異的阻害タンパク質であるカルパスタチンの相互作用様式とそれに必要な配列を明かにしてショウジョウバエのカルパスタチン遺伝子の単離のための準備とプローブの作成を行った。
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