1993 Fiscal Year Annual Research Report
プロテインキナーゼFAを中心にしたインスリンの情報伝達系の解析
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04454599
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| Research Institution | Tokyo University |
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Principal Investigator |
榎本 武美 東京大学, 薬学部, 助教授 (80107383)
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| Keywords | インスリン / プロティンキナーゼF_A / MAPキナーゼ / Swiss 3T3 / トロンビン / GTP結合蛋白質 / PI-3キナーゼ |
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| Research Abstract |
プロテインキナーゼF_A(PKF_A)は不活性型のプロテインホスファターゼ1を活性化する酵素として発見されたセリン・スレオニン型のプロテインキナーゼである。当初の計画では、チロシンキナーゼの活性をもつ受容体の活性化と、その後に起きる蛋白質のセリン・スレオニンのリン酸化、脱リン酸化をつなぐものとしてPKF_Aを想定し、インスリン受容体刺激後のPKF_Aの活性の変動を調べたが、調べた系全てでその変化が観察されなかった。そこで、チロシンキナーゼとセリン・スレオニンキナーゼを結ぶものとしてMAP(mitogen activated protein)キナーゼに注目し、その活性化の情報伝達系をSwiss 3T3細胞を使って解析した。
増殖を停止したSwiss 3T3細胞の培養系にEGFを添加すると、添加後2.5分をピークとするリン酸化活性の上昇が観察され、FPLC MonoQカラムにかけることによりこの活性の上昇はMAPキナーゼの活性化によるものであることが確認された。EGFの他、ホルボールエステル、トロンビン、ブラジキニン等でもMAPキナーゼの活性の上昇が観察され、この上昇とDNA合成の誘導とに相関がみられた。このうちトロンビンによるMAPキナーゼの活性化を詳細に検討した。この活性化は、3量体GTP結合蛋白質をADPリボシル化する百日咳毒素、PI-3キナーゼを阻害するwortmanninにより部分的に阻害され、また、ホルボールエステル前処理によっても阻害され、この活性化の経路には、GTP結合蛋白質、PI-3キナーゼ、Cキナーゼが関与することが明らかになった。また、この研究と平行して、リン酸化カスケードの最終標的の一つとしてDNAトポイソメラーゼIIに着目し、そのリン酸化を詳細に解析した。
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[Publications] Enomoto,T.: "Cellcycle-dependent phosphorylation of topoisomerase II and modification of its activity by phosphorylation." Molecular biology of DNA topoisomerases and its application to chemotherapy.65-75 (1993)
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[Publications] Kimura,K.: "Growth state- and cell cycle-dependent fluctuation in the expression of two forms of DNA-topoisomerase II and possible specific modification of the higher molecular weight form." Journal of Biological Chemistry. 269(in press). (1994)
