1992 Fiscal Year Annual Research Report

アデノシン受容体を介する細胞内情報伝達機構の分子生物学的解明

Research Project

Project/Area Number	04454603
Research Institution	Tokyo Metropolitan Institute for Neuroscience
Principal Investigator	中田裕康東京都神経科学総合研究所, 神経生化学, 副参事研究員 (00041830)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	斉藤佳子東京都神経科学総合研究所, 神経生化学, 主事研究員 (70241263) 斉藤修東京都神経科学総合研究所, 神経生化学, 主事研究員 (60241262)
Keywords	アデノシン受容体 / プリン受容体 / クローニング / 蛋白精製 / 細胞内情報伝達 / 脱感作 / 遺伝子発現
Research Abstract	アデノシン受容体の作用機構を遺伝子工学的手法とタンパク化学的手法を用いて解明しようとするのが本研究の目的である。 1.アデノシン受容体のクローニングと共役系の同定:多彩なアデノシンの作用は既知以外のアデノシン受容体サブクラスの存在を示唆しており、遺伝子組み替え及び蛋白分離技術を利用して既知のアデノシン受容体とは異なるサブタイプの単離を試みた。マウス脳よりcDNAライブラリーを調製して、A1及びA2アデノシン受容体のcDNAプローブとハイブリダイズするコロニーを数多く得た。しかしながら現在のところそれらの中より既知の受容体以外のクローンは得られていない。一方、アデノシン受容体の非特異的リガンドである[^3H]NECAに対する結合活性を指標としてラット脳膜画分よりこれまで報告のないリガンド結合特異性を持つアデノシン結合蛋白を部分精製することに成功し、アデノシン受容体の新しいサブタイプの可能性を示唆した。 2.受容体活性調節機構の解明:アデノシン受容体の脱感作現象を培養細胞やさらに実験動物を用いて分析して、タンパクおよび遺伝子レベルで受容体活性の発現調節の分子機構を明らかにしようと試みた。まず精製単離したA1アデノシン受容体がリン酸化酵素により修飾を受けるかを、in vitroでA-キナーゼによるリン酸化により試みたが受容体分子への有意なリン酸化や活性の変化は観察されなかった。しかしながら、アデノシンA2受容体を持つことが知られているラットPheochromocytoma PC12細胞に培養条件下でアデノシンアゴニストを添加すると、迅速なA2受容体mRNAの減少とゆっくりとした回復が見いだされた。このmRNAレベルでの調節はアデノシン受容体では初めての例であり、さらに詳しい遺伝子レベルの解析を続けている。さらにPC12細胞はこの時いわゆる神経突起とは異なる短い突起をアデノシンA2受容体を介する機構で形成することも明らかになった。

Research Products
(3 results)

All Other

All Publications (3 results)

[Publications] 中田裕康: "Antibodies raised against the adenosine receptor agonist,5'-N-ethylcarboxamidoadenosine(NECA)." Journal of Biochemistry. 113. 241-244 (1993)
[Publications] 中田裕康: "Development of an antiserum to rat brain A_1 adenosine receptor.Application for immunological and structural comparison of A_1 adenosine receptors from various tissues and species." Biochimica et Biophysica Acta.
[Publications] 中田裕康: "Use of affinity chromatography in purification of adenosine receptors." Methods in Molecular Biology:Protocols in Molecular Neurobiology. 13. 261-271 (1992)

1992 Fiscal Year Annual Research Report

アデノシン受容体を介する細胞内情報伝達機構の分子生物学的解明

Principal Investigator

中田 裕康 東京都神経科学総合研究所, 神経生化学, 副参事研究員 (00041830)

Research Products

[Publications] 中田 裕康: "Antibodies raised against the adenosine receptor agonist,5'-N-ethylcarboxamidoadenosine(NECA)." Journal of Biochemistry. 113. 241-244 (1993)

[Publications] 中田 裕康: "Development of an antiserum to rat brain A_1 adenosine receptor.Application for immunological and structural comparison of A_1 adenosine receptors from various tissues and species." Biochimica et Biophysica Acta.

[Publications] 中田 裕康: "Use of affinity chromatography in purification of adenosine receptors." Methods in Molecular Biology:Protocols in Molecular Neurobiology. 13. 261-271 (1992)

中田裕康東京都神経科学総合研究所, 神経生化学, 副参事研究員 (00041830)

[Publications] 中田裕康: "Antibodies raised against the adenosine receptor agonist,5'-N-ethylcarboxamidoadenosine(NECA)." Journal of Biochemistry. 113. 241-244 (1993)

[Publications] 中田裕康: "Development of an antiserum to rat brain A_1 adenosine receptor.Application for immunological and structural comparison of A_1 adenosine receptors from various tissues and species." Biochimica et Biophysica Acta.

[Publications] 中田裕康: "Use of affinity chromatography in purification of adenosine receptors." Methods in Molecular Biology:Protocols in Molecular Neurobiology. 13. 261-271 (1992)