マウス系統特異抗体を用いたキメラマウス組織の解析と認識抗原遺伝子のクローニング

1993 Fiscal Year Final Research Report Summary

• Project/Area Number: 04455028
• Research Category: Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: 広領域
• Research Institution: The Institute of Physical and Chemical Research
• Principal Investigator: 日下部 守昭 理化学研究所, 真核生物研究室, 副主任研究員 (60153277)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 馬場 忠 筑波大学, 応用生物化学系, 助教授 (40165056)
• Project Period (FY): 1992 – 1993
• Keywords: キメラマウス / 細胞系譜 / マウス系統特異抗体 / 遺伝疾患モデル動物 / ストレス蛋白 / ミトコンドリア / 細胞間相互作用 / 免疫組織化学

Research Abstract

1)神経系異常ミュータントのリーラーマウスと正常マウス間でキメラマウスを作製し、その小脳組織のキメリズムを解析したところ、正常由来細胞の組織参加によってリーラー由来プルキンエ細胞が正常な位置に移動し機能することが分かった。しかし、正常由来の神経細胞の中にはその移動を阻害されているものもあり、リーラーマウスの異常は神経細胞の移動を支えるグリア系細胞の異常であることが示唆された。
2)単抗体を用いてC3HマウスcDNAライブラリーをスクリーニングし抗原遺伝子のcDNA塩基配列とアミノ酸配列を決定し、この抗原蛋白はミトコンドリアに局在する新しい熱ショック蛋白ファミリーのひとつであることを示した。
3)このcDNAを用いて陰性の系統の相同抗原遺伝子のcDNAの塩基配列を決定したところ、C3HとBALB/cの間で1925番目のGがAに、1943番目のCがGに変異している箇所が見つかったので、変異部を分離したキメラ遺伝子を作製し発現させた後、ウエスタンプロッティングにて検討した結果、後者の変異が抗体認識部位であった。
4)染色体遺伝子の構造解析の結果、この遺伝子は17個のエクソンと16個のイントロンよりなっていることが解かった。この遺伝子は染色体マッピングによって18番染色体上にあることが解かった。また、この遺伝子には他にイントロンを含まない偽遺伝子が存在し、X染色体上にあることが解かった。

Research Products

• [Publications] Yoshida,H.,Nishikawa,S-I.,Okamura,H.,Sakakura,T.and Kusakabe,M.: "The role of c-kit proto-oncogene during melanocyte development in mouse.In vivo approach by the in utero microinjection of anti-c-kit antibody." Devel.Growth Diff.35. 209-220 (1993)
• [Publications] Yoshiki,A.,Moriwaki,K.,Sakakura,T.and Kusakabe,M.: "Histological studies on male sterility of hybrids between laboratory and wild mouse strains." Devel.Growth Diff.35. 271-281 (1993)
• [Publications] Yoshiki,A.,Sakakura,T.,and Kusakabe,M.: "The mouse chimera during intra-uterine stages:Immunohistological analysis by using C3H strain-specificantibody." J.Histochem.Cytochem.41. 1583-1590 (1993)
• [Publications] Michikawa,Y.,Baba,T.,Arai,Y.,Sakakura,T.and Kusakabe,M.: "Antigenic protein specific for C3H strain mouse is a mitochondrial stress-70 protein." BBRC. 196. 223-232 (1993)
• [Publications] Michikawa,Y.,Baba,T.,Arai,Y.,Sakakura,T.and Kusakabe,M.: "Structure and organization of the gene encoding a mitochondrial stress-70 protein in mouse" FEBS letter. 336. 27-33 (1993)
• [Publications] Noguchi,M.,Sato,M.,Mori,N.,Hayashi,M.and Kusakabe,M.: "Japan Scientific Societies Press KARGER" “Biology of the Germ Line-In Animal and Man"edited by H.Mohri et al., 304 (1993)