ドパミン受容体機能分子発現制御によるパーキンソン病の新しい薬物治療の開発

1993 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 04557037
• Research Institution: The University of Tokyo
• Principal Investigator: 金澤 一郎 東京大学, 医学部(医), 教授 (30110498)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 楠 進 東京大学, 医学部(医), 助手 (90195438)
• Keywords: ドパミンレセプター / ヒトゲノミックDNA / プロモーター解析 / 線条体細胞培養 / 黒質細胞培養 / 神経栄養因子

Research Abstract

パーキンソン病の新しい治療の原理を見出すことを目的として、ヒトドパミンセプターの遺伝子解析と黒質ニューロンの培養系を用いた神経栄養因子の解析を行なってきた。本年度は、まず当初の計画に従って、ヒトドパミンレセプター(D_<1A>)の染色体遺伝子を単離し、そのプロモーター解析を行なった。ヒトD_<1A>のcDNA塩基配列からプライマーを合成し、ヒトゲノミックDNAからPCR産物をえた。これをプローブとしてヒトゲノミックDNAライブラリー約90万個をスクリーニングし、約40個の陽性クローンを単離した。これらのファージDNAから前述のプライマーでPCR反応を行ないD_<1A>をコードするクローンを選択し、最終的にシーケンスで確認した。得られた約20kbのクローンにはD_<1A>の2個のエクソン全長が含まれ、その上流域も約10kb含まれていた。この間米国NIHからこのD_<1A>遺伝子のエンハンサー領域の報告があったので、我々としてはその転写調節機構を調べるために、EC細胞P19のレチノイン酸による神経細胞への分化誘導系を用いて、プロモーター解析を始めた。同時に、細胞導入法を用いてD_<1A>遺伝子を導入し、POU転写因子群がD_<1A>転写に影響を与える可能性についても解析を始めた。さらに我々は、大脳皮質・線条体・黒質(実際にはドパミン含有細胞を含む中脳腹吻側部のスライスの無血清・共培養に成功した。胎生(E)14日のラットから採取した場合にはドパミン細胞は遊走して中脳部から抜け出すが、E15から採取した場合には中脳内に止まって突起を線条体へ伸ばし、線条体内でも網目状の突起を張り巡らす。このことは、E14-15の間に細胞の性質が大きくかわることを意味する。なお、中脳の単独培養では突起進展も乏しく、線条体由来の液性因子、例えば神経栄養因子の存在が示唆される。

Research Products

• [Publications] Kondo I & Kanazawa I: "Debrosoquine hydroxylase and Parkinson's disease" Advances in Neurology. 60. 338-342 (1993)
• [Publications] Murata M & Kanazawa I: "Repeated L-DOPA administration reduces the ability of dopamine storage and abolishes the supersensitivity" Neuroscience Research. 16. 16-23 (1993)
• [Publications] Okazawa H,Nishiyama K,---Kanazawa I: "Trk immunoreactivity at neuronal dendrite & cell body" Biochemical Biophysical Research Communi.194. 683-690 (1993)
• [Publications] Okazawa H,Kamei M,& Kanazawa I: "Molecular cloning and expression of a novel truncated form of chicken trkC" FEBS Letters. 329. 171-177 (1993)
• [Publications] Yokota H,Tamura S,--Kanazawa I---: "Evidence for a new variant CYP2D6 allele CYP2D6J in a Japanese population associated with lower in vivo---" Pharmacokinetics. 3. 256-263 (1993)