1993 Fiscal Year Annual Research Report

DNA複製開始部位を利用しての高効率形質発現ベクターの作製と遺伝子治療への応用

Research Project

Project/Area Number	04557105
Research Institution	Hokkaido University
Principal Investigator	有賀寛芳北海道大学, 薬学部, 教授 (20143505)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	有賀早苗北海道大学, 医療技術短期大学部, 助教授 (90184283) 上田正次雪印乳業, 生物科学研究所, 課長(研究担当)
Keywords	c-myc / p53 / N-myc / DNA複製 / 結合タンパク質
Research Abstract	昨年までにc-myc,免疫グロブリンH鎖、hsp70遺伝子上にDNA複製開始領域を同定し、それらを含むプラスミドDNAが自律増殖配列として機能することを明らかにしてきた。今年度これらを更に詳細に解析すると同時にp53,N-myc遺伝子上にも自律増殖配列が存在することを明らかにした。p53に関しては最終エキソン下流1000-2000塩基対に自律増殖配列を同定した。この全塩基配列を決定したところ、上流にp53結合配列が存在し、そこより1500塩基対下流にDNA折れ曲がり構造が存在した。DNA折れ曲がり構造は原核細胞から動物細胞遺伝子DNA複製開始領域にしばしば観察される。またこの配列中にp53認識配列が存在することは我々が以前にp53が複製因子であるという結果を指示するものといえる。このDNA折れ曲がり構造には3種のタンパク質が結合することが明らかとなった。一方N-myc遺伝子転写エンハンサーと重複して自律増殖配列が存在した。この配列はより神経細胞に高い複製活性を示し興味ある配列であった。これら及び以前より報告している各種自律増殖配列は形質発現ベクターとして有用であり、その結合タンパク質発現系とカップルした形で高効率発現ベクターを構築している。その例としてc-myc遺伝子上の配列に結合するMSSPcDNAをクローニングし詳細に検討した結果、MSSPが複製因子として機能することが明らかとなり今後の応用が期待された。

Research Products
(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] Iguchi-Ariga,S.M.M.: "Idcntification of initiation region of DNA replication in murine immunoglobulin heavy chain gene and possible function of octamer motif as a putatibe DNA" Biochim.Biophys.Acta. 1172. 73-81 (1993)
[Publications] Saegusa,Y.: "Human Alu family stimulates DNA replication and transcription of SV40 system and identification of Alu binding protein." Biochim.Biophys.Acta. 1172. 274-282 (1993)
[Publications] Galli,I.: "Mammalian genomic sequences can substitute for the SV40 AT stretch in sustaining replication of the SV40." FEBS Lett.318. 335-340 (1993)
[Publications] Kakizaki,I.: "Cell cycle-dependent activation of human c-myc enhancer." Int.J.Onc.2. 657-661 (1993)
[Publications] Imamura,Y.: "Transcriptional regulation of the N-myc gene.Identification of positive regulatory element and its double-and single-stranded DNA binding protein." Biochim.Biophys.Acta. 1216. 273-285 (1993)
[Publications] Nishita,Y.: "Identification of the DNA bending region in human c-myc gene and its binding protein." Int.J.One.3. 701-706 (1993)

1993 Fiscal Year Annual Research Report

DNA複製開始部位を利用しての高効率形質発現ベクターの作製と遺伝子治療への応用

Principal Investigator

有賀 寛芳 北海道大学, 薬学部, 教授 (20143505)

Research Products

[Publications] Iguchi-Ariga,S.M.M.: "Idcntification of initiation region of DNA replication in murine immunoglobulin heavy chain gene and possible function of octamer motif as a putatibe DNA" Biochim.Biophys.Acta. 1172. 73-81 (1993)

[Publications] Saegusa,Y.: "Human Alu family stimulates DNA replication and transcription of SV40 system and identification of Alu binding protein." Biochim.Biophys.Acta. 1172. 274-282 (1993)

[Publications] Galli,I.: "Mammalian genomic sequences can substitute for the SV40 AT stretch in sustaining replication of the SV40." FEBS Lett.318. 335-340 (1993)

[Publications] Kakizaki,I.: "Cell cycle-dependent activation of human c-myc enhancer." Int.J.Onc.2. 657-661 (1993)

[Publications] Imamura,Y.: "Transcriptional regulation of the N-myc gene.Identification of positive regulatory element and its double-and single-stranded DNA binding protein." Biochim.Biophys.Acta. 1216. 273-285 (1993)

[Publications] Nishita,Y.: "Identification of the DNA bending region in human c-myc gene and its binding protein." Int.J.One.3. 701-706 (1993)

有賀寛芳北海道大学, 薬学部, 教授 (20143505)