1993 Fiscal Year Annual Research Report
GSA-IIで認識される消化管粘膜上皮細胞亜群の免疫組織化学的、分子生物学的研究
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04670022
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| Research Institution | Miyazaki Medical College |
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Principal Investigator |
菅沼 龍夫 宮崎医科大学, 医学部, 教授 (60115350)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
生沼 勉 宮崎医科大学, 医学部, 助手 (20168842)
川野 純一 宮崎医科大学, 医学部, 助手 (10136822)
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| Keywords | 粘液糖蛋白質 / レクチン / GSA-II / 消化管 / 副細胞 / コア蛋白質 / 抗体 / 免疫組織化学 |
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| Research Abstract |
胃底腺副細胞、噴門腺細胞、幽門腺細胞および十二指腸ブルンネル腺細胞に共通して発現するGriffonia simplicifolia agglutinin(GSA-II)が認識する粘液糖蛋白質を精製するために以下の実験を行った。ラット胃粘膜をホモジナイズし、SephacrylS-1000カラムによりGSA-II認識粘液糖蛋白質をふくむ高分子量画分を分離し、ヒママメレクチン(RCA-I)アガロースとバンデイラマメ(GSA-II)レクチンアガロースによアフイニテイ精製を繰り返し、GAS-II認識糖蛋白質(GMG)を分離精製した。さらにこのGMGにtrifluoromethansulfonic acid(TFMS)処理を施し、GMGのdeglycosylationを行いdeglycosylatedGSA-II認識糖蛋白質(deGMG)をうることに成功した。このdeGMGを家兎に免役し、抗血清を得た。得られた抗血清のcharacterizationを行ったところdeGMGに対する本抗血清の特異性が確認された。本抗血清を用いてラットの種々の組織を免疫染色して検索したところ、胃底腺副細胞の粘液果粒、十二指腸腺のゴルジ野が強く染色され、胃底腺表層細胞、小腸杯細胞のゴルジ野にも染色が認められ他の組織では反応が認められなかった。これらの結果から本抗体はGMGの蛋白質部分を認識していることが判明した。このようにGMGに対する特異抗体をうることが出来たので免疫スクリーニング法によるGMGのコア蛋白質部分をコードするcDNA解析への基盤が完成した。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Oinuma T,Kawano J,Suganuma T: "Bromodeoxyuridine immunohistochemistry on cellular differentiation and migration in the fundic gland of Xenopus laevis during development." Cell Tissue Res.269. 205-212 (1992)
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[Publications] Kawano J,Oinuma T,Nakayama T,Suganuma T: "Characterization of beta 1-4 galactosyltransferase purified from rat liver microsomes" J.Biochem.111. 568-572 (1992)
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[Publications] 菅沼 龍夫: "脊椎動物の胃底腺副細胞-その組織化学的側面" 電子顕微鏡. 28. 30-36 (1993)
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[Publications] Aoki T,Kawano J,Oinuma T,Haraguchi Y,Eto T,Suganuma T: "Human colorectal carcinoma-specific glycoconjugates detected by pokeweed mitogen lectin." J.Hisochem.Cytochem.41. 1321-1330 (1993)
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[Publications] Yamanari H,Suganuma T,IwamuraT,Kitamura N,Taniguchi S,Setoguchi T: "Extracellular matrix components regulating glandular differentiation and the formation of basal lamina of a human pancreatic cancer cell line in vitro." Exp.Cell Res.in press.
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[Publications] Kawano J,Ide S,Oinuma T,Suganuma T: "A protein-specific monoclonal antibody to rat liver beta1→4 galactosyltransferase and its application to immunohistochemistry." J.Histochem.Cytochem.in press.
