小脳変性関連遺伝子の培養細胞における発現調節と組換え蛋白を用いた動物モデルの開発

1992 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 04670503
• Research Institution: Kanazawa Medical University
• Principal Investigator: 酒井 宏一郎 金沢医科大学, 医学部, 講師 (70225754)
• Keywords: 小脳変性 / 抗神経細胞抗体 / 組換え体蛋白 / B細胞エピトープ / leucine zipper

Research Abstract

paraneoplastic cerebellar degeneration(PCD)患者の血清及び髄液中に存在する抗神経細胞抗体の認識する小脳Purkinje細胞抗原PCD17のcDNAを原核細胞発現ベクターに組み換え、大腸菌内での蛋白合成を試みた。合成された組換え体蛋白を用いて、paraneoplastic syndrome患者の血清と髄液をWestern blot法により検索したところ、検索した全てのPCDの患者の血清および髄液中にこのPCD17抗原を認識する抗体の存在が確認された。一方、paraneoplastic sensory neuropathyやparaneoplastic limbic encephalitisの患者の血清あるい髄液中には、検索した全ての検体においてPCD17抗原を認識する抗体は存在しなかった。このことより、PCD17蛋白がPCDに特異的かつ共通する抗原であることを明らかにした。さらに、ELISA法により患者の血清及び髄液よりPCD17に対する抗体を迅速に測定する方法を確立した。また、PCD-17遺伝子を制限酵素により、種々の断片を作製してベクターに組換えた後、種々の欠損部位を有する組換え体蛋白を合成し、その抗原性をWestern blot法とELISA法により検討した。その結果、leucine zipper domainに相当するアミノ酸の領域が、PCD患者の血清中に存在する抗purkinje細胞抗体によって認識されることが明らかとなり、このことから、leucine zipper領域がPCDに特異的かつ共通する抗原の主要なB細胞エピトープであることを確認した。

Research Products

• [Publications] K.Sakai,et al.: "The expression of a cerebellar degeneration-associated neural antigen in human tumor line cells." Neurology. 42. 361-366 (1992)
• [Publications] K.Sakai,et al.: "Analysis of autoantibody binding to paraneoplastic cerebellar degeneration-associated antigen expressed in recombinant proteins." Ann Neurol.
• [Publications] 酒井 宏一郎: "Paraneoplastic syndromeへの分子生物学的アプローチ" 神経内科. 37. 327-336 (1992)
• [Publications] 酒井 宏一郎 他: "悪性腫瘍のremote effect" モダンコンセプト神経内科.