1992 Fiscal Year Annual Research Report
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04670509
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| Research Institution | Institute for Developmental Research, Aichi Human Service Center |
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Principal Investigator |
仙波 りつ子 愛知県心身障害者コロニー発達障害研究所, 周生期学部, 主任研究員 (80100163)
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| Keywords | プロテオグリカン / PC12細胞 / 増殖 / 突起形成 / 神経成長因子 / グリコサミノグリカン |
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| Research Abstract |
予備実験において、脳可溶性画分から調製した数種類のコンドロイチン硫酸プロテオグリカン(CSPG)混合物が、PC12細胞の増殖および突起形成を阻害することを観察した。そこで、本年度は、まず、脳から可溶性のCSPGを多量に調製し、この現象を確かめる実験を行ない以下の結果を得た。
1.PC12細胞の増殖および突起形成は、脳可溶性画分から調製したCSPGの混合物(CSPG-Mix)、コアプロテインとして250KをもつCSPG(CSPG-250)およびコアプロテイン150K,130Kおよび93KをもつCSPGの混合物(CSPG-Low)のいずれによっても阻害された。しかしながら、軟骨由来のCSPGでは阻害されなかった。
2.プロテオグリカンは、糖鎖部分であるグリコサミノグリカン(GAG)とコアプロテイン部分に大別できるので、上記のCSPGから、GAGとコアプロテインを調製しPC12細胞に作用させたところ、いずれのCSPGの場合にも、コアプロテイン部分に阻害作用が観察された。
3.上記のCSPG存在下でチミジンの取り込みを調べたところ、CSPG添加後少なくとも12時間はチミジンの取り込み低下はなかった。一方、CSPG添加後48時間でDNA含量を調べたところ、CSPG存在下で培養した細胞のDNA含量は2倍になっていた。また顕微分光測光法において個々の細胞のDNA含量を測定した結果、CSPG処理した細胞では、70%以上の細胞が約2倍のDNA含量を有していた。
以上の結果より、PC12細胞の増殖および突起形成の対するCSPGの阻害作用は、脳由来のCSPGに特異的であり、CSPGのコアプロテイン部分に作用部位のあることが明らかとなった。また、CSPGによるPC12細胞の増殖阻害は、細胞周期のG2期で起きていることが明らかとなった。
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[Publications] Shozuhara,H.: "Temporal profiles of nerve growth factor β-subunit level in rat brain regions after transient ischemia." Journal of Neurochemistry. 59. 175-180 (1992)
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[Publications] Katoh-Semba,R.: "Nerve growth factor-induced changes in the structure of sulfated proteoglycans in PC12 Pheochromocytoma cells." Journal of Neurochemistry. 59. 282-289 (1992)
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[Publications] 仙波 りつ子: "脳可溶性コンドロイチン硫酸プロテオグリカンによるPC12細胞の増殖および突起形成阻害:細胞環境の影響" 神経化学. 31. 356-357 (1992)
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[Publications] Katoh-Semba,R.: "Core proteins of soluble chondroitin sulfate proteoglycans purified from ther at brain block the cell cycle of PC12D cells." Journal of Cellular Physiology. (1993)
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[Publications] Katoh-Semba,R.: "An Acceleration of age-related increases in levels of the β-subunit of nerve growth factor in selected tissues from senescence accelerated mice(SAM-P/8)." Journal of Molecular Neuroscience. (1993)
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[Publications] Katoh-Semba,R.(分担執筆): "Neurotrophic factors (pp.185-196)" Japan Scientific Societies Pree,Tokyo, 242 (1992)
