ラット肝実質細胞より得られた増殖関連遺伝子hep1の構造及び発現調節機構の解析

1993 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 04670797
• Research Institution: Dokkyo University School of Medicine
• Principal Investigator: 大竹 英樹 独協医科大学, 医学部, 助教授 (00049214)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 渡辺 和人 独協医科大学, 医学部, 助手 (80146167) ; 長谷川 薫 独協医科大学, 医学部, 講師 (40049250)
• Keywords: 細胞増殖 / 増殖関連遺伝子 / differential plaque hybrdidization / cDNAライブラリー / DNA シークエンシング / Hep313 細胞 / 遺伝子発現調節

Research Abstract

平成4年度は、ラットhep 1遺伝子(r-hep 1)に由来する完全鎖長cDNA(2.7Kb)のクローニングをおこなった。
ラットhep 1遺伝子のcDNAについては、すでに鎖長が1.6Kbあるクローンを得ているが完全鎖長のcDNAを得るため新たに肝実質細胞のlambdagt10cDNAライブラリーを作製した。Northernblot hybridization法によりmRNAのサイズを求めると約2.7Kbであった。1.6KbのcDNAをプローブとしてこのライブラリーをスクリーニングしたところ、約2.7Kbの完全鎖長をもっと考えられるクローンを得ることができた。その塩基配列を決定しhomologyを検索したところ、ラットPC12細胞で刺激すると発現してくるPC3遺伝子のcDNAの塩基配列と同じであった。PC3/r-hep 1遺伝子がコードする蛋白質は細胞の増殖開始あるいは分化に関連して分泌されるものと考えられる。
平成5年度は、ヒトhep 1遺伝子(hum-hep 1)のクローニングを行った。
r-hep 1 cDNA(2.7kb)をプローブとしてヒト胎盤cDNAライブラリー(米国Clontech社製)をスクリーニングし3.1kbのcDNAクローンを得た。これをプラスミドpBluescript llにサブクローニングしたのちその塩基配列の一部を決定しhomology検索を行ったところ、得られたクローンはr-hep 1と約80%相同であった。Northernblot hybridization法によりこのヒトhep 1相同遺伝子(hum-hep 1)のmRNAのサイズを調べたところ約3.1Kbであったので、このクローンはhum-hep 1由来の完全鎖長cDNAであると考えられる。hum-hep 1がどの染色体に乗っているかを調べたところ1番の染色体であることがわかった。ヒト肝実質細胞に由来するHep3B細胞におけるhum-hep 1の発現をNorthernblot hybridization法により調べたところ骨格筋、心筋等に比べ極くわずかであるが細胞周期に一致した発現がみられた。

Research Products

• [Publications] Watanabe,K.,Hasegawa,H.,Ohtake,H.,Tohyam,C.,Koga.M.: "Inhibition of DNA synthesis by EDTA and its cancellation by zins in primary cultures of adult rat hepatocytes" Biomedical Research. 14. 99-110 (1993)
• [Publications] 古床敏行 他編: "臨床遺伝医学 lll 分子病(ノーザンブロツト ハイブリダイゼーション)" 診断と治療社, 643(8) (1993)