1993 Fiscal Year Annual Research Report
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04671139
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| Research Institution | The Nippon Dental University, Niigata |
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Principal Investigator |
下村 浩巳 日本歯科大学, 新潟歯学部, 教授 (40139259)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
今井 あかね 日本歯科大学, 新潟歯学部, 助手 (60180080)
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| Keywords | ANP / ANP receptor / amylase / cAMP / cGMP / parotid gland / Gi protein / adenylate cyclase |
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| Research Abstract |
耳下腺に於けるcGMPの役割を調べる事を目的として、ラット耳下腺ANP受容体遺伝子の発現、およびANP刺激によるcGMP、cAMP濃度変化およびamylase分泌に与える影響を調べ、以下の結果を得た。
1)ラット耳下腺及び顎下線細胞膜画分と^<125>I-ANPとの結合は、タンパク質量に比例して増加しプラトーに達した。ANPによる結合阻害実験から、IC_<50>値は、耳下腺5×10^<-9>M,顎下腺10^<-9>Mであった。唾液腺にANP受容体タンパク質が存在する事を確認した。
2)ラット耳下腺の腺房細胞をANP(10^<-7>M)で刺激するとコントロールの2倍を超えるcGMPの上昇が認められた。また、ANPはcAMPの濃度変化に対してはほとんど影響を与えなかったが,forskolinによるadenylate cyclaseの活性化やamylase分泌を抑制することが明らかとなった。
3)ANP,nitroprusside(NP),hydroxylamine(HA)は、forskolinの存在の有無に係わらずcGMP濃度を上昇させた。他方、ANPはforskolinによるcAMP濃度の上昇を抑制したが、NPやHAにはこの抑制作用は認められなかった。また、forskolinやdi-Bu-cAMP、isoproterenolによるamylase分泌はANPにより抑制されたが、NPやHAでは変化がなかった。これらの結果、耳下腺におけるANPによるcAMP濃度減少やamylase分泌抑制に、細胞内のcGMPの直接的な関与はないと推定された。
4)forskolinやisoproterenolによって誘導されるcAMP濃度上昇やamylase分泌はANPによって抑制されるが、この抑制は耳下腺細胞および耳下腺細胞膜をpertussis toxin(PT)で処理することによって抑制された。耳下腺腺房細胞をPT処理するとGiタンパク質がribosylationを受けることにより、ANPのcAMPおよびamylase分泌抑制はANP clearance受容体を介したGiタンパク質によるアデニル酸シクラーゼ活性の抑制に基づくと推定された。
6)耳下腺細胞内ホスホジエステラーゼ(PDE)の分離同定を行い、PDE特異的抑制剤に対する感受性や分子量測定によって、タイプI,II,III,およびIV cAMP-specific PDEが存在することを明らかにした。
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[Publications] 梨田智子: "唾液腺Atrial Natriuretic peptide(ANP)受容体とサイクリックヌクレオチドの濃度変化" 歯科基礎医学会雑誌(補冊). 34. 123- (1992)
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[Publications] 屋部朋子: "ラット唾液腺Atrial Natriuretic peptide(ANP)受容体に関する研究" 歯学. 80. 1441-1449 (1993)
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[Publications] 今井あかね: "ラット唾液腺プロテインキナーゼに対するサイクリックヌクレオチドの働き" 歯学. 81. 397-404 (1993)
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[Publications] 梨田智子: "ラット耳下腺におけるANP(atrial natriuretic peptide)のアミラーゼ分泌およびcyclic nucleotide濃度に対する影響" 生化学(抄録). 65. 1088- (1993)
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[Publications] 今井あかね: "心房性ナトリウム利尿ペプチド(ANP)による唾液腺アデニレートシクラーゼ活性の抑制とcGMPの働き" 歯科基礎医学会誌(補冊). 35. 82- (1993)
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[Publications] T.Nashida: "Influence of atrial natriuretic peptide(ANP) on cyclic nucleotides and amylase release in rat parotid gland in vitro" Archs Oral Biology. (in press).
