1993 Fiscal Year Annual Research Report
細胞におけるアニオンの役割の解明:アニオン一次能動輸送系の分子生物学的研究
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04671352
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| Research Institution | Okayama Prefectural University |
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Principal Investigator |
池田 己喜子 岡山県立大学, 保健福祉学部, 教授 (20112154)
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| Keywords | カサノリ / CL^-輸送性ATPase / sulfate permease / アニオン一次能動輸送系 / 遺伝子クローニング |
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| Research Abstract |
1.Cl 輸送性ATPaseの遺伝子クローニング
1)b(50kDa)サブユニットについて:C末端及びその下流領域をコードするクローンをpoly(A)^+RNAより得た。その全一次構造は478アミノ酸から成り,分子量51,513であった。ホモロジーサーチの結果,クラミドモナスCF_1-ATPase,betaサブユニットと最も高い相同性を示した。ノザーン解析により,10kb以上,7.5及び3.8kbのメッセージが検出された。カサノリCF_1-及びMF_1-betaをコードする遺伝子断片をプローブとした場合,約2.2kbのメッセージが検出された。即ち,FタイプATPase,beta様遺伝子が3種類存在する。
2)a(54kDa)サブユニットについて:N末端から全長の約50%をコードする遺伝子断片(803bp)を得た。そのアミノ酸配列は,ホウレンソウCF_1-alphaサブユニットと約75%の相同性を示した。但し,カサノリCF_1-alpha遺伝子断片と比較すると,塩基配列で77%,アミノ酸配列で84%の相同性を示すがそれぞれ独立のものであった。これまでの結果をあわせると,カサノリCl^-輸送性ATPaseはアニオンを輸送するが一次構造からはFタイプATPase familyに属するものといえる。アニオン輸送路を形成するものは精製標品に常にminor componentとして存在する40kDaのポリペプチドと推定され,現在クローニングを進めている。
2.sulfate permeaseについて:これまでに得ていたcysA,sbp遺伝子断片並びに同属のmaltose permease,malK遺伝子断片をプローブとしてノザーン解析を行なった。それぞれ1.7,1.55,1.65kbのメッセージが検出され,いわゆるABCタイプATPaseのカサノリにおける発現を確認した。これは植物において初めての例である。
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[Publications] Ohhashi,T.,Katsu,T.& Ikeda,M.: "Improvement of reconstitution of the Cl^--translocating ATPase isolated from Acetabularia acetabulum into liposomes and several anion pump characteristics" Biochim.Biophys.Acta. 1106. 165-170 (1992)
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[Publications] 池田己喜子.守谷智恵.大森晋爾: "生体膜に存在するアニオン輸送系の研究-Cl^-輸送性ATPase及び硫酸イオン輸送系の解析" 日本学術振興会「学術月報」. 46. 838-845 (1993)
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[Publications] Satoh,S.,Moritani,C.,Ohmori,S.& Ikeda,M.: "Partial purification and characterization of chloroplast ATPase in Acetabularia acetabulum" Biosci.Biotech.Biochem.in press. 58. (1994)
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[Publications] 池田己喜子: "細胞におけるアニオンの役割:カサノリに存在するCl^-輸送性ATPase及び硫酸イオン輸送系の解析" 薬学雑誌. (発表予定). (1994)
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[Publications] Moritani,C.,Rahman,H.Md.,Ohmori,S.,Yamauchi,M.,de Groot,E.J.,Oesterhelt,D.& Ikeda,M.: "Sulfate uptake system in Acetabularia acetabulum" Planta,. (in press). (1994)
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[Publications] Moritani,C.,Ohhashi,T.,Tagaya,M.,Fukui,T.,Lottspeich,F.,Oesterhelt,D.& Ikeda.M.: "Primary structure of the Cl^--translocating ATPase,b subunit of Acetabularia acetabulum" Planta,. (in press). (1994)
