遺伝子解析による巨核球性細胞の分化・成熟過程の検索とその白血病診断への応用

1992 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 04671434
• Research Institution: Kobe University
• Principal Investigator: 山口 延男 神戸大学, 医学部, 教授 (00026890)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 近藤 信一 神戸大学, 医学部附属病院, 講師 (50153721) ; 寮 隆吉 神戸大学, 医学部附属病院, 講師 (00159237)
• Keywords: 巨核球系株化細胞 / 巨核球性白血病 / GM-CSF受容体β鎖 / IL-6リセプター / IL-6 / PF4 / 巨核球・血小板・膜糖蛋白 / in situ hybridization

Research Abstract

本研究は巨核球・血小板系の分化・成熟過程を分子生物学的に検索し白血病化巨核球ないし前駆細胞の分子生物学的特徴を明らかにして、白血病化細胞における増殖能と分化能との関係および良性増殖性巨核球と腫瘍性増殖能との鑑別について確証を得ることを目的としている。今年度の研究で得られた成果の主なものは次の通りである。(1)巨核球関連細胞株を用いて、巨核球表面糖蛋白GP Ib,IIb,IIIa及び個有蛋白platelet factor4(PF4)、およびIL-6及びIL-6受容体のcDNAを用いてin situ hybridization法(ABC法による発色)を行いNothern blot法と比較した。K562細胞ではGP IIIa mRNA,CMK細胞ではGP Ib,IIb,IIIaそれぞれのmRNA,HEL細胞ではこれら凡てのGPs遺伝子とPF4 mRNAが検出され、標本上で個々の細胞のmRNA発現度を比較でき、実用上有用であった。またこれら巨核球系細胞ではIL-6及びIL-6受容体mRNAの発現がみられ、巨核球はIL-6のオートクライン機構で分化している可能性が示された。(2)巨核球前駆細胞が分化段階に応じて異なったサイトカインに反応する機構を解明するために、CMK細胞を用いてGM-CSF受容体β鎖及びIL-6受容体遺伝子の動きを観察した。CMK細胞はTPA又はIL-6で成熟するが、GM-CSF受容体β鎖mRNAは当初減量したのち徐々に増加し、IL-6受容体mRNAは経時的に増量した。この事からGM-CSF受容体β鎖を共有するGM-CSFとIL-3は巨核球前駆細胞の早期の分化・増殖に、IL-6はより後期の分化・成熟に関与することが知られた。(3)巨核球関連細胞株のうち、K562細胞,CMK細胞HEL細胞ではGPIbα,IIb,IIIa mRNAの発現がみられたが、PF4 mRNAはより分化・成熟したHEL細胞だけに発現していた。このことからPF4 mRNAの検索は巨核球系細胞の成熟度ないし腫瘍化度の判定に有用な指標と考えられ、引続き研究を続行している。

Research Products

• [Publications] J.Jikai: "In Situ Hybridization法による巨核球でのmRNAの検出" 臨床病理. 40. 841-847 (1992)
• [Publications] A.Yosida: "Expression of P62,A putative collagen receptor,on human megakaryocytic leukemia cells" Leukemia and Lymphoma. 6. 196-196 (1992)
• [Publications] M.Adachi: "Induction of smg p21/rap1A p21/krev-1 p21 gene expression during phorbol ester-induced differentiation of a human megakaryocytic leukemia cell line." Oncogene. 7. 323-329 (1992)
• [Publications] M.Yasunaga: "Detection of platelet-specific protein mRNAs in different Megakaryoblasts using the reverse transcriptase polymerase chain reaction" Leukemia and Lymphoma. 7. 505-510 (1992)
• [Publications] R.Ryo: "Megakaryocytic leukemia and platelet factor 4" Leukemia and Lymphoma. 8. 327-336 (1992)
• [Publications] M.Yasunaga: "Modulation of GM-CSF receptor β-subunit and interleukin-6 receptor mRNA expression in a human megakaryocytic leukemia cell line" Leukemia and Lymphoma. 8. 397-403 (1992)