1992 Fiscal Year Annual Research Report
糖尿病におけるインスリンレセプター自己燐酸化能低下の機序解析インスリンレセプターを基質としたProtein Tyrosine Phosphatase(PTPase)活性の検討
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04671477
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
河盛 隆造 大阪大学, 医学部第一内科, 講師 (00116021)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
今野 英一 大阪大学, 医学部附属病院第一内科, 医員
渡会 隆夫 大阪大学, 医学部附属病院第一内科, 医員
岩間 令道 大阪大学, 医学部附属病院第一内科, 医員
森島 豊彦 大阪大学, 医学部第一内科, 助手 (50221635)
山崎 義光 大阪大学, 医学部第一内科, 助手 (40201834)
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| Keywords | インスリンレセプター / 自己燐酸化 / PTPase / バキュロウイルス |
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| Research Abstract |
糖尿病患者にみられるインスリン抵抗性は、インスリンレセプターの自己燐酸化の低下が主因であると考えられる。その際に、PTPaseが果たす役割を検討するため、大量のPTPase及びインスリンレセプターを発現させ、インスリンレセプターを基質としたPTPaseの酵素学的性状を検討せんとした。
PTPasecDNA、インスリンレセプターcDNAを発現ベクター(PVL1392、PVL1393)に組み込んだ。野生型baculovirusの昆虫の細胞(Sf9)へ感染させ、その際に組替えを起こさせ、組替え体をplague hybridizaかon法を用いて選抉した。この組替えウィルスをsf9に感染させることにより、PTPaseを大量に発現させ、WGAカラムを用いて部分精製した。ラット肝より回収したインスリンレセプターを、インスリン存在下に^<32>P-ATPを用いて^<32>Pを取り込ませ、これを基質として部分精製PTPaseの活性を測定、性状を検討した。
その結果、このPTPaseは自己燐酸化したインスリンレセプターを基質とすることが明かとなった。また、ストレプトゾトシン糖尿病ラットの肝臓、脾臓よりRNAを回収し、PTPasemRNAを測定した。その結果、非糖尿病ラットに比し、PTPasemRNAの発現量は有為な差を認めなかった。従って、少なくともこのPTPaseは、糖尿病状態では、発現量ではなく、その酵素活性の亢進により、インスリンレセプターの自己燐酸化能を低下させている可能性が推定された。
さらに、発現ベクターpcDLにPTPase遺伝子を組み込み、燐酸カルシウム法により培養肝細胞HepG2にtraustectし、部分精製したインスリンレセプターに自己燐酸化能の検討を行うことにより、糖尿病状態におけるPTPaseの果たす役割を検討している。
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[Publications] Imano E: "Rapid Screening method of abrcorma insulin-receptor gene expression-Allele-specific oligonucleotide hybridization by using sikent poymorphism." Biochem Biophys Acta. (1993)
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[Publications] Kajimoto Y: "An AP-1 enhancer madiates TPA-induced transcriptional activation of the chicken insulinーlike growth factor I gene." Biochemical and Biophysical Research. (1993)
