Na^+/I^-symporterのクローニングと発現

1993 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 04671493
• Research Institution: Miyazaki Medical College
• Principal Investigator: 小谷 富男 宮崎医科大学, 医学部, 助教授 (10161936)
• Keywords: ヨードポンプ / クローニング

Research Abstract

前年度Na^+/I^-symporterのexpression cloningを目的にFRTL-5から抽出したmRNAを用いてcDNAを作製し、これを発現vectot pCDM8に挿入。500〜2,000個の大腸菌コロニーからなるプールからplasmidを抽出しCos7細胞にデキストラン法によりtransfection、Cos7の^<125>Iの取り込みを測定することによりNa^+/I^--symporterのcDNAクローニングを試みた。しかし、上記スクリーニングシステムではsymporterをクローニング出来ず、プラスミッドをtransfectionしたCos7に^<125>Iを取り込ませるというシステムそのものに問題があると結論した。
今年度は前年度の反省からVilijn等が行ったFRTL-5のmRNAをXenopus oocyteに注入し^<125>Iを取り込ませるシステムにより、Na^+/I^--symporterのクローニングを試みることにした。大腸菌コロニーのプールからプラスミッドを抽出した後、in vitroでmRNAを合成し、このmRNAをoocyteに注入する方法である。マイクロインジェクシヨンの設備及び経験がなかったため、設備を整えoocyteを調整しマイクロインジェクシヨンに慣れるのに時間がかかり、現在のところ結果を出すに至っていない。