オートファゴゾーム膜の生化学的性質とそのリソゾーム経由蛋白分解に於ける役割

1993 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 04680200
• Research Institution: Juntendo University School of Medicine
• Principal Investigator: 上野 隆 順天堂大学, 医学部, 講師 (10053373)
• Keywords: 自食胞 / リソゾーム / オートファゴゾーム / 蛋白質分解

Research Abstract

前年度の実験で、ロイペプチン・E64cを投与したラット肝から分離した自食胞膜をさらに10mMCaCl_2で処理した後、低速の遠心で沈澱する分画(AL-H)は、自食胞膜が由来するとされる小胞体マーカー(cytochrome P450)の外、エンドゾームマーカー(マンノース6リン酸受容体)及びリソゾームマーカーを共有し、形成後間もない初期の自食胞に由来すると考えられた。5年度はこのH分画の蛋白成分の生化学的解析を行い、次の知見を得た。
1.AL-H分画を二次元電気泳動で解析し、新たに小胞体マーカーとしてBiP、エンドソームマーカーとしてトランスフェリン受容体の、二つが同定された。2.AL-Hをウサギに免疫して得られた膜抗体をAL-H分画に特異的な70k成分を認識する。二次元電気泳動で分離した膜蛋白のイムノブロットより、標的抗原はpIの異なる2つの成分に分かれ、この内主要な方は酸性の糖蛋白であった。小麦胚芽レクチンに依るアフィニティークロマトグラフィーで精製し、目下アミノ酸の1次配列の決定を試みているが、酸性の糖蛋白であるから、複合型の糖鎖を持つ可能性が高い。一方、この膜抗体全体から70kに対する抗体をアフィニティ精製し、免疫電顕に依って自食胞膜への局在を調べることを計画したが、70kの含量が少ないことと、この抗体が認識するもう一つの主要抗原が1gp120であることから、先ず1gp120と反応する抗体を抗原で吸収して除き、70k特異的な抗体のみを精製しようと試みている。3.AL-H分画に含まれるcytochrome P450は、グループ特異的な抗体によるイムノブロットで2Cタイプが主要成分で有ること、その他に2B、2Eタイプも若干含まれることが判明した。しかしながら二次元電気泳動で分離したP450のアミノ酸一次配列は既存の2CタイプのP450のものとは合致せず、新しいタイプのものである可能性が示唆された。

Research Products

• [Publications] Daisaku Muno: "Processing and transport of the precursor of cathepsin C during its transfer into lysosome." Archives of Biochemistry and Biophysics. 306. 103-110 (1993)
• [Publications] 上野隆: "単離オートリソゾーム膜の分画とその性質" 生化学. 65巻. 957 (1993)
• [Publications] 上野隆: "タンパク質の寿命と代謝" 現代化学. 22(増刊). 115-122 (1993)