1993 Fiscal Year Annual Research Report
ヒトの脂肪酸およびエイコサノイドomega水酸化P-450の構造と機能
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04680202
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| Research Institution | Fukuyama University |
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Principal Investigator |
楠瀬 正道 福山大学, 工学部, 教授 (10046766)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
菊田 安至 福山大学, 工学部, 助手 (50224895)
山本 覚 福山大学, 工学部, 講師 (10191404)
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| Keywords | omega水酸化 / チトクロームP-450 / エイコサノイド / 脂肪酸 / ロイコトリエン / cDNAクローニング |
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| Research Abstract |
1.ヒトの肝ミクロゾームより,脂肪酸omega水酸化酵素(P450HLomega)を15nmol P450/mg蛋白質の比含量に迄精製した。本P450HLomegaはSDS-PAGE上,52,000の見かけの分子量を示した。更にヒトの肝cDNAライブラリーより,ウサギの脂肪酸omega水酸化酵素(CYP4A5)のcDNAをプローブとして,脂肪酸omega水酸化酵素のcDNAクローンを単離した。このcDNAから推定されるアミノ酸残基5から25迄の配列は,未決定の一残基を除いてP450HLomegaのN末端配列と同一であった。このcDNAは519個のアミノ酸から成る分子量59,347の蛋白質をコードした。本cDNAより推定されるアミノ酸配列はCYP4A5と82%の相同性を示した。ノーザンブロット分析の結果,このcDNAにハイブリダイズするmRNAはヒトの肝臓と腎臓に発現することが認められた。発現ベクターpAAH5を用いて本cDNAを酵母に発現させた蛋白質は,見かけの分子量約52,000で種々の脂肪酸のomega水酸化反応を触媒した。これよりこのcDNA(CYP4A11)はヒト肝脂肪酸omega水酸化酵素P450HLomegaに相当することが証明された。
ヒト好中球のcDNAライブラリーより,ウサギのプロスタグランジンomega水酸化酵素(CYP4A4)のcDNAをプローブとして,ロイコトリエンB_4omega水酸化酵素(P450LTBomega)のcDNAを単離した。本cDNAによりコードされる酵素は520のアミノ酸残基よりなり,分子量は59,805である。本酵素を酵母内に発現させたところ,ロイコトリエンB_4のomega水酸化を触媒し,そのKm値は0.71muMであった。本酵素のアミノ酸配列は脂肪酸やプロスタグランジンomega水酸化酵素(CYP4A)と42〜43%の相同性を示し,P450遺伝子スーパーファミリーにおいてファミリー4の中の新しいサブファミリー4F(CYP4F3)の一員であることが明かになった。
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[Publications] Kikuta,Yasushi: "A novel form of Cytochrome P-450 family 4 in human Polymorphonuclear leukocytes:cDNA cloning and expression of leukotriene B4omega-hydroxylase" The Journal of Biological Chemistry. 268. 9376-9380 (1993)
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[Publications] Sawamura,Arata: "Catalytic properties of rabbit kidney fatty acid omega-hydroxylase cytochrome P-450 ka2(CYP4A7)" Biochimica Biophysica Acta. 1168. 30-36 (1993)
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[Publications] Kusunose,Masamichi: "Fatty acid omega-oxidation and eicosanoid metabolism" Cytochrome P-450. Second edition. 127-141 (1993)
