トランスジェニック植物のウイルス病に対する広域抵抗性の発現機構に関する研究

1992 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 04806007
• Research Institution: The University of Tokyo
• Principal Investigator: 難波 成任 東京大学, 農学部, 助教授 (50189221)
• Keywords: トランスジェニック植物 / ウイルス病抵抗性 / 広域抵抗性 / アグロバクテリウム / 植物ウイルス / 外被タンパク質 / 形質転換

Research Abstract

平成4年度はまず、キュウリモザイクウイルス(cucumber mosaic virus,CMV)およびジャガイモYウイルス(potato virusY,PVY)・パパイヤリングスポットウイルス(papaya ringspot virus,PRV)・ズッキーニイエローモザイクウイルス(zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)・カボチャモザイクウイルスII(watermelon mosaic virus,WMVII)・チューリップモザイクウイルス(tulip mosaic virus,TBV)の各ポチウイルスを隔離温室において増殖し、純化し、ゲノムRNAを抽出・精製した。さらに、精製したそれぞれのゲノムRNAよりcDNAを合成し、プラスミドベクターにそう入して大腸菌(Eschericia coli)を形質転換しクローニングした。これらの各クローンを用いて、各ウイルスゲノムの塩基配列を決定し、分折の結果明らかになった各ウイルスの外被タンパク質遺伝子をCPCR(custom polymerasechain reaction)法により各ウイルスの外被タンパク質遺伝子を増幅した。えられた増幅外被タンパク質遺伝子DNA断片をユニバーサルな植物発現ベクターにつなぎ込み、発現カセットを構築した。この発現カセット部分を制限酵素により切り出して、TiプラスミドベクターpGA482GGに組み込み、これをAgrobacterium tumefaciensに導入し、リーフディスク法により細胞を形質転換した。これらの植物組織を培地上で培養し、培地の組成を調製することにより再分化を促した。できた幼植物体を須化の後、現在閉鎖系の人工気象器に移して育成中である。

Research Products

• [Publications] Namba,S.ら: "Protection of transgenic plants expressing the coat protein gene of watermelon mosaic virus II or zucchini yellow mosaic virus against six potyviruses." Phytopathology. 82. 940-946 (1992)
• [Publications] Ochi,M.ら: "Nucleotide sequence of the 3'‐terminal region of potato virus T RNA." Ann.Phytopath.Soc.Japan. 58. 416-425 (1992)
• [Publications] Morita,Y.ら: "A new disease of Phalaenopsis and Doritaenopsis caused by Nectria haematococca." Aun.Phytopath.Soc.Japan. 58. 452-455 (1992)
• [Publications] Hidaka,M.ら: "Cloning and sequencing of the 3'half of a patato virus Y(Ostrain)genome encoding the 5K protein,protease,polymerase and coat protein." Nuc.Acids.Res.20. 3515- (1992)
• [Publications] 難波 成任: "potyvirus抵抗性の分子育種" 植物細胞工学. 4. 101-109 (1992)
• [Publications] 難波 成任: "16S rRNA遺伝子のPCR増幅による植物病原MLOの検出と分類" 植物防疫. 47. 38-45 (1993)