非特異的脂質移送蛋白質と交叉反応を示す60KDの蛋白質の局在と機能

1992 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 04833023
• Research Institution: Kansai Medical University
• Principal Investigator: 田代 裕 関西医科大学, 学長 (40077558)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 山本 章嗣 関西医科大学, 医学部, 講師 (30174775)
• Keywords: 非特異的脂質移送蛋白質 / スチロール移送蛋白質2 / 60kDの成分 / ペルオキシソーム / 網膜色素上皮細胞 / 肝細胞 / ラット / Zellweger症候群

Research Abstract

非特異的脂質移送蛋白質(nsL-TP)と交叉反応を示す60KD成分、およびnsL-TPの細胞内局在と機能について研究し、次の結果を得た。
1).先ず二種の抗60KD、蛋白抗体を作製した。その一つは60KD成分のN末端側phe^<181>-Ser^<205>ペプチドに対する抗ペプチド抗体で(anti+60k-2)、もう一つは2)β-ガラクトシダーゼ-60kD融合蛋白質(anti-βgal-60k)に対する抗体である。
2).これらの抗体を用い、ラット肝〓モジエネート、ペルオキシソーム画分、精製nsL-TPのウエスタンプロット分析を行った。その結果60kD成分のほかに45kD成分が検出されることが分った。
3).ラットの様々の組織のイムノブロット法による解析も行った。その結果、肝細胞からは60kD、45kD成分が検出されたが、網膜、腎、副賢小腸などからは45kD成分が主として検出された。
4).45kD成分が60kD成分の分解産物か、それとも交叉反応産物であるかが問題となった。
5).そこで45kDの精製を試みたが、現在のところ成功していない。
6).nsL-TPのラット網膜色素上皮細胞における局在をコロイド金法で調べ、nsL-TPはアイクロペルオキシソームのマトリックス中に多数先出されることが分った。しかもアシルCoAオキシターゼと共存することが分った。視細胞外節に多量存在するdocosaheraenoicacidのβ酸化をペルオキシソームは行っていると考えた。
7).Zellweger症候群やneonatal adrenoleu kodytrophyの患者の繊維芽細胞中ではペルオキシソームは形成されず、nsL-TPセカタラーゼは上清中に見出された。

Research Products

• [Publications] Junko Deguchi: "Localization of nonspecific lipid transfer protein (nsLTP=sterol carrier protein 2) and acyl-CoA oxidase in peroxisomes of pigment epithelial cells of rat retina." J.Histochem.Cytochem.40. 403-410 (1992)
• [Publications] Yasuyuki Suzuki: "Different intracellular localization of peroxisomal proteins in fibroblasts from patients with aberrant peroxisome assembly." Cell Struct.Funct.17. 1-8 (1992)
• [Publications] Yutaka Tashiro,Yukio Fujiki: "Localization,biosynthesis,and cDNA cloning of nonspecific lipid transfer protein (sterol carrieer protein 2)of rat liver with special reference to the cross-reacting 60 kDa protein.“The Post-Translational Modification of proteins". Ed.S.Tuboi,N.Taniguchi and N.Katsunuma." Japan Scientific Societies Press,
• [Publications] 13 (1992)