1993 Fiscal Year Annual Research Report
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05044169
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
田中 亀代次 大阪大学, 細胞生体工学センター, 教授 (80144450)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
HOEIJMAKERS J.H.J. エラスムス大学, 医学部, 教授
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| Keywords | DNA修復 / 色素性乾皮症 / DNA結合 / 蛋白結合 / ノックアウトマウス |
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| Research Abstract |
A群色素性乾皮症(XPA)遺伝子およびERCC1遺伝子は、ヌクレオチド除去修復(NER)の初期段階に重要な働きをする遺伝子である。我々は、XPA蛋白が傷害を受けたDNAに特異的に結合する事、C末端に蛋白結合ドメインを持つ事を明らかにした。一方、ERCC1蛋白は一本鎖DNAに結合し、エンドヌクレアーゼのサブユニットである事が示唆されている。そこで、XPAとERCC1蛋白が相互作用をするか否かを明らかにする為、XPA蛋白と全細胞抽出液を混ぜ、XPA蛋白と特異的に結合した蛋白をSDS-PAGEで分離後、抗ERCC1蛋白抗体を用いたウエスタンブロット法で解析したところ、ERCC1蛋白がXPA蛋白に結合している事が明らかになった。結合は0.5M NaCl存在下でも認められ、強固であった。HoeijmakersよりERCC1 cDNAを得てin vitro translation法でERCC1蛋白を生成し、XPA蛋白と混ぜると、やはりERCC1蛋白はXPA蛋白と結合する事が明らかになった。さらに、Hoeijmakersより種々の変異ERCC1 cDNAを得て、in vitro translation法で変異ERCC1蛋白を作りXPA蛋白との結合を調べており、ERCC1蛋白の蛋白結合ドメインを明らかにしつつある。又、Hoeijmakersが精製した組換えERCC1蛋白とXPA蛋白との結合の有無、その意義も検索中である。ERCC1蛋白複合体のエンドヌクレアーゼは傷害特異性がないと考えられており、XPA蛋白との相互作用でその特異性を獲得するのではないかと考えられている。一方、XPAおよびERCC1ノックアウトマウスを、我々およびHoeijmakersのグループが作成した。XPAマウスは正常に発育したのに比し、ERCC1マウスは生後1か月で死亡した。ERCC1遺伝子はNER以外の生命維持の基本機構にも関与する事が示唆された。
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[Publications] Tanaka,K.et al.: "Xeroderma pigmentosum and nucleotide excision repair of DNA." Trends in Biochemical Sciences. 19. 83-86 (1994)
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[Publications] Satokata,I.et al.: "Genomic characterization of the human DNA excision repair-controlling gene XPA." Gene. 136. 345-348 (1993)
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[Publications] Masutani,C.et al.: "Cell-free repair of UV-damaged simian virus 40 chromosomes in human cell extracts." J.Biol.Chem.268. 9105-9109 (1993)
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[Publications] J.H.J.Hoeijmakers et al.: "Molecular analysis of Human DNA repair genes and syndromes." Int.J.Cancer. 53. 162-163 (1993)
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[Publications] L.Schaeffer et al.: "DNA repair helicase:a component of BTF2(TFIIH)basic transcription factor.(research article)" Science. 260. 58-63 (1993)
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[Publications] A.J.van Vuuren et al.: "Evidence for a repair enzyme complex involving ERCC1,and the correcting activities of ERCC4,ERCC11 and the xeroderma pigmentosum group F." EMBO J.12. 3693-3701 (1993)
