1993 Fiscal Year Annual Research Report
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05261204
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| Research Institution | Tokyo Institute of Technology |
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Principal Investigator |
久永 眞市 東京工業大学, 生命理工学部, 助教授 (20181092)
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| Keywords | 老人性痴呆症 / PHF / タウ / cdc2キナーゼ / リン酸化 / ニューロフィラメント |
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| Research Abstract |
Neurofilament-Hサブユニット(NF-H)のリン酸化部位を認識する抗体はPHFタウとも反応することから、NF-HとPHF-tauは同一キナーゼによってリン酸化されていると考えられる。NF-Hをリン酸化するキナーゼを同定、精製し、その性質を調べることにより、PHF形成の仕組みを明らかにすることができるのではないかと考えた。
脱リン酸化型NFを基質に用いることにより、NF-Hキナーゼの特異的なアッセイ法が確立できた。この方法を用いてブタ脳抽出液中に存在するNF-Hキナーゼ活性を調べたところ、そのほとんどは微小管分画に回収された。NF-Hキナーゼを微小管分画から各種カラムを用いて精製した。精製NF-Hキナーゼは脳cdc2様キナーゼであるcdk5と同一であることが、cdk5に対する抗体を用いたブロッティングにより示された。NF-HキナーゼはNF-Hのin vivoのリン酸化部位をリン酸化していた。NF-Hキナーゼは正常脳内でtauを最もよくリン酸化しているキナーゼの一つであることが、NF-Hの特異的阻害剤であるbutyrolactone Iを用いた実験より示された。
今後は、本キナーゼとPHF形成との関連をより直接的に示すため、神経の分化、老化に伴うキナーゼの発現と活性制御をcDNAや抗体を用いて調べるとともに、リン酸化tauによるPHF形成のin vitro実験系の確立を目指していく予定である。
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[Publications] Ookata,K.: "Association of p34^<cdc2>/cyclin B complex with microtubules in starfish oocytes." J.Cell Sci.105. 873-881 (1993)
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[Publications] Ando,S.: "Phosphorylation of synthetic vimentin peptides by cdc2 kinase." Biochem.Biophyc.Res.Commun.195. 837-843 (1993)
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[Publications] Ohta,K.: "Microtubule nucleating activity of centrosomes in cell-free extracts from Xenopus eggs:" J.Cell Sci.104. 125-137 (1993)
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[Publications] Hisanaga,S.: "Dephosphorylation of microtubule-binding sites at the neurofilament-H tail domain by alkaline,acid,and protein phosphatases." J.Biochem.113. 705-709 (1993)
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[Publications] Hisanaga,S.: "Tau protein kinase II has a similar characteristic to cdc2 kinase for phosphorylating neurofilament proteins." J.Biolog.Chem.268. 15056-15060 (1993)
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[Publications] Hisanaga,S.: "Phosphorylation of native and reassembled neurofilaments composed of NF-L,NF-M,and NF-H by the catalytic subunit of cAMP-dependent protein kinase." Mol.Biol.Cell. 5(in press). (1994)
