1995 Fiscal Year Annual Research Report

ES細胞を用いた未知遺伝子の検索

Research Project

Project/Area Number	05275103
Research Institution	Kumamoto University
Principal Investigator	山村研一熊本大学, 医学部, 教授 (90115197)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	仲村春和東北大学, 加齢医学研究所, 教授 (90079690) 若松佑子名古屋大学, 生物分子センター, 助教授 (20026800) 松居靖久東北大学, 加齢医学研究所, 助教授 (40241575) 中辻憲夫国立遺伝学研究所, 遺伝実験生物保存センター, 教授 (80237312) 東雄二郎大阪大学, 細胞工学センター, 助教授 (30181069)
Keywords	遺伝子トラップ / 相同遺伝子組換え / ES細胞 / 始原生殖細胞 / メダカ / ゼブラフィッシュ / ニワトリ / レトロウイルスベクター
Research Abstract	遺伝子トラップ法において、トラップベクターが複数コピー組み込まれた場合は、トラップクローンからの内在性遺伝子の単離は容易ではない。このため、余分なベクター部分を取り除くためにloxP配列を組み込んだベクターの作製に成功した。このベクターを用い、トラップクローンを100個単離し、うち60個について胚様体を形成させ、発現パターンを解析した。約650kbのマウスDNAを含むYACを導入したトランスジェニックマウスの3系統の作製に成功した。δクリスタリン遺伝子の転写因子として単離されたδEF-1について、C末端側の破壊マウスでは主に胸腺の異常が出現するが、完全欠損では四肢の異常椎間板の欠損が起こることがわかった。始原生殖細胞の時期特異的な発現遺伝子の単離を試みた。また、レチノイン酸とLIFの存在下で長期に増殖する始原生殖細胞では、他の方法に比し燐酸カルシウム法による遺伝子導入の効率がよいことを明らかにした。始原生殖細胞の培養によって単離したEG細胞の、未分化状態での増殖に関与する蛋白キナーゼの単離同定を試み、sky遺伝子が特異的に発現することを発見した。メダカの胞胚を培養することにより単離したOLES2細胞の培養条件を確立し、この細胞を用いてキメラメダカを作製することに成功した。ゼブラフィッシュの胞胚期の細胞はキメラ形成能のあること、ニワトリのオ-ガナイザー領域をゼブラフィッシュに移植しても、神経誘導が起こることがわかった。ニワトリにおいてenは視蓋原基の吻側で弱く、尾側で強い発現を示すが、レトロウイルスベクターを用いて吻側で発現させるか、あるいはen-2を強制発現している組織の移植により、正常では視蓋の尾則に投射する網膜鼻側線維が吻側にも枝をだすこと、したがって、enが視蓋原基尾側への投射に関与することを明かにした。

Research Products

(11 results)

All Other

All Publications (11 results)

[Publications] Nagata,Y.et al.: "A 6-kb upstream region of the human transthyretin gene can direct developmental,tissue-specific,and quantitatively normal expression in transgenic mouse." J.Biochem.117. 169-175 (1995)
[Publications] Kitamura,D.et al.: "Molecular cloning and characterization of mouse HS1." Biochem.Biophys.Res.Commun.208. 1137-1146 (1995)
[Publications] Hashido,K.et al.: "Copy-dependent and position-independent expression of rat aldolase A gene." J.Biochem.118. 601-606 (1995)
[Publications] Hiramatsu,R.et al.: "The 3′enhancer region determines the B/T specificity and pro-B/pre-B specificity of immunoglobulin Vк-Jк joining." Cell. 83. 1113-1123 (1995)
[Publications] Ohkubo,Y.et al.: "Autonomous regulation of proliferation and growth arrest in mouse primordial germ cells studied by mixed and clonal cultures." Exp.Cell Res.in press (1995)
[Publications] Koshimizu,U.et al.: "Retinoic acid is a potent growth activator of mouse primordial germ cells in vitro." Devel.Biol.168. 683-685 (1995)
[Publications] Matsubara,N.et al.: "Murine po like kinase 1 gene is expressed in meiotic testicular germ cells and oocytes." Mol.Reprod.Dev.41. 407-415 (1995)
[Publications] Tsai,H,J.et al.: "Initiation of the transgenic lacZ gene expression in medaka (Oryzias latipes) embryos." Mol.Marine Biol.Biotech.4. 1-9 (1995)
[Publications] Itasaki,N.et al.: "A role for gradient en expression in positional specification on the optic tectum." Neuron. 16. 55-62 (1996)
[Publications] Torigoe,K.et al.: "YAC-based 1.5 Mb contig spanning the human multidrug resistantce gene region and delineating the amplification unit in two human multidrug resistant cell lines." Genome Research. (in press). (1996)
[Publications] Kusaba,H.et al.: "Functional expression of yeast artificial chromosome (YAC) -human multidrug resistance genes in mouse cells." Genome Research. (in press). (1996)

1995 Fiscal Year Annual Research Report

ES細胞を用いた未知遺伝子の検索

Principal Investigator

山村 研一 熊本大学, 医学部, 教授 (90115197)

Research Products

[Publications] Nagata,Y.et al.: "A 6-kb upstream region of the human transthyretin gene can direct developmental,tissue-specific,and quantitatively normal expression in transgenic mouse." J.Biochem.117. 169-175 (1995)

[Publications] Kitamura,D.et al.: "Molecular cloning and characterization of mouse HS1." Biochem.Biophys.Res.Commun.208. 1137-1146 (1995)

[Publications] Hashido,K.et al.: "Copy-dependent and position-independent expression of rat aldolase A gene." J.Biochem.118. 601-606 (1995)

[Publications] Hiramatsu,R.et al.: "The 3′enhancer region determines the B/T specificity and pro-B/pre-B specificity of immunoglobulin Vк-Jк joining." Cell. 83. 1113-1123 (1995)

[Publications] Ohkubo,Y.et al.: "Autonomous regulation of proliferation and growth arrest in mouse primordial germ cells studied by mixed and clonal cultures." Exp.Cell Res.in press (1995)

[Publications] Koshimizu,U.et al.: "Retinoic acid is a potent growth activator of mouse primordial germ cells in vitro." Devel.Biol.168. 683-685 (1995)

[Publications] Matsubara,N.et al.: "Murine po like kinase 1 gene is expressed in meiotic testicular germ cells and oocytes." Mol.Reprod.Dev.41. 407-415 (1995)

[Publications] Tsai,H,J.et al.: "Initiation of the transgenic lacZ gene expression in medaka (Oryzias latipes) embryos." Mol.Marine Biol.Biotech.4. 1-9 (1995)

[Publications] Itasaki,N.et al.: "A role for gradient en expression in positional specification on the optic tectum." Neuron. 16. 55-62 (1996)

[Publications] Torigoe,K.et al.: "YAC-based 1.5 Mb contig spanning the human multidrug resistantce gene region and delineating the amplification unit in two human multidrug resistant cell lines." Genome Research. (in press). (1996)

[Publications] Kusaba,H.et al.: "Functional expression of yeast artificial chromosome (YAC) -human multidrug resistance genes in mouse cells." Genome Research. (in press). (1996)

山村研一熊本大学, 医学部, 教授 (90115197)