1995 Fiscal Year Annual Research Report
遺伝子工学的手法を用いた肺癌の転移診断と治療に関する研究
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05404047
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| Research Institution | Chiba University |
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Principal Investigator |
山口 豊 千葉大学, 医学部, 教授 (80009448)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
飯笹 俊彦 千葉大学, 医学部・付属病院, 助手 (10272303)
馬場 雅行 千葉大学, 医学部・付属病院, 助手 (00143305)
柴 光年 千葉大学, 医学部, 助手 (20162620)
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| Keywords | 肺癌 / 転移 / 癌転移関連遺伝子 / マトリックスメタロプロティナーゼ / 4型コラゲナーゼ / 遺伝子治療 / アンチセンスDNA |
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| Research Abstract |
本研究は肺癌における転移関連遺伝子やその遺伝子産物(特にマトリックスメタロプロティナーゼ)の発現を、肺癌の細胞株および臨床例の組織において遣唐使、肺癌転移に関連した新しい遺伝子のクローニングを試みることにより、肺癌転移の分子機構の一部を明らかにし、肺癌の転移診断や遺伝子治療の一助となることを目的とし計画された。
癌転移の研究は分子レベルで急速に発展しており、腫瘍細胞より産生されるマトリックスメタロプロティナーゼ(MMP・2およびMMP・9)は、基底膜の主要構成成分であるIV型コラーゲンを破壊し、癌の転移や浸潤に重要な役割を果たすといわれている。本研究では、平成6年度にはザイモグラム法やノーザンブロット法を用い、MMP・2およびMMP・9の発現が、さまざまな肺癌細胞株により、大きく異なることを明らかにした。平成7年度はMMP・2およびMMP・9の阻害酵素として話題になったTIMP・1およびTIMP・2の発現もあわせて検討をおこなっている。また種々の経路により、これら細胞株をヌードマウスに移植し、肺癌細胞の転移浸潤能をあきらかにするとともに、これら酵素のモノクローナル抗体をもちいて、手術の際摘出された腫瘍組織を免疫染色し、その発現と臨床経過との相関を検討している。
新しい癌転移関連遺伝子をクローニングするために必要な肺癌細胞株は、数株が樹立されたものの、転移好発株を得ることは困難であった。現在は手術材料をもちい原発巣および転移巣から直接cDNAライブラリーを作成し、サブトラクション法によって原発巣に特異的に発現されるcDNAをλZAPIIベクターに組み込みスクリーニングをおこなっている。
平成7年度は前年度の結果を踏まえ、癌転移関連遺伝子(とくにIV型コラゲナーゼ)およびその阻害酵素の発現とその転移浸潤能を、肺癌細胞株をもちい分子レベルで明らかにするとともに、臨床例をもちい、免疫組織染色をおこない、その発現の意義につき解析を進めてきた。また肺癌の転移に際し重要な役割をはたすと考えられる遺伝子は、cDNAサブトラクション法をもちい、クローニングには至らないものの候補を見い出しており、今後スクリーニングによってされに限定することができるものと考える。今後さらにMMP・2、MMP・9に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドを用い、腫瘍細胞に対する転移抑制効果を検討する予定である。平成8年度はこのような変更点を考慮し、さらに実験法に検討を加え研究を完成する予定である。
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Research Products
(1 results)
