1995 Fiscal Year Annual Research Report
海馬神経細胞グルタミン酸受容体サブユニットの電気生理学的および分子生理学的同定
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05404088
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| Research Institution | Gunma University |
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Principal Investigator |
小澤 瀞司 群馬大学, 医学部, 教授 (40049044)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
都筑 馨介 群馬大学, 医学部, 講師 (60222139)
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| Keywords | 海馬ニューロン / グルタミン酸受容体 / 単一ニューロン / ホールセルパッチクランプ / 逆転写 / PCR / AMPA受容体 / GluR2サブユニット |
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| Research Abstract |
本考案の目的は、電気生理学的および分子生物学的実験法を併用することにより、海馬ニューロンのグルタミン酸受容体チャネルの機能的性質とサブユニット構成との関連を単一ニューロンレベルで明らかにすることである。具体的にはラットの海馬ニューロンを対象として、ホールセルパッチクランプ法により受容体の電気生理学的特性を調べた後、細胞質を電極内に吸引し、細胞質のmRNAをDNAに逆転写(Reverse Transcription: RT)し、このDNAをPolymerase Chain Reaction(PCR)法によって増幅し、このPCR産物に大して制限酵素解析を行い、当該ニューロンのグルタミン酸受容体を構成するサブユニットの種類を同定する実験を行う。今年度は昨年度に引き続き、海馬切片の多種類のニューロンのAMPA受容体の電圧・電流特性とCa^<2+>透過性を系統的に調べ、それらのニューロンのAMPA受容体のサブユニット構成を単一ニューロンRT‐PCR法により推定した。パッチクランプ解析の後、AMPA受容体遺伝子mRNAが検出された36個の細胞の内訳は、錐体細胞9個、I型非錐体ニューロン(外向き整流特性とCa^<2+>不透過性のAMPA受容体を発現する介在ニューロン)11個、II型非錐体ニューロン(内向き整流特性とCa^<2+>透過性のAMPA受容体を発現する介在ニューロン)16個であった。錐体細胞8個、I型非錐体ニューロン7個ではGluR2サブユニットの発現が検出されたが、II型非錐体ニューロン16個のいずれからもこのサブユニットは検出されなかった。この結果は基本的には以前に報告した培養海馬ニューロンの結果と類似するものであるが、錐体細胞、I型非錐体ニューロンの一部にGluR2サブユニットの発現が検出されないものがあり、その理由については現在検討中である。
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[Publications] Isa, T. et al: "Spermine mediates inward rectification of Ca^<2+>-permeable AMPA receptor channels." NeuroReport. 6. 2045-2048 (1995)
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[Publications] Isa, T. et al: "Distribution of neurones expressing inwardly rectifying and Ca^<2+>-permeable AMPA receptors in rat hippocampal slices." Journal of Physiology. 491.3. 719-733 (1996)
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[Publications] Ozawa, S. et al.: "Molecular basis for functional differences of AMPA-subtype glutamate receptors." News in Physiological Sciences. (in press). (1996)
