有用形質転換動物開発の基礎としての遺伝子発現調節機構に関する研究

1994 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 05454111
• Research Institution: The University of Tokyo
• Principal Investigator: 舘 鄰 東京大学, 農学部, 教授 (30011711)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 高橋 迪雄 東京大学, 農学部, 教授 (30011943) ; 田中 智 東京大学, 農学部, 助手 (90242164) ; 東條 英昭 東京大学, 農学部, 助教授 (20041668) ; 中込 弥男 東京大学, 医学部, 教授 (30000235)
• Keywords: SRY遺伝子 / c-kit / mWAP / プロラクチン受容体 / シバヤギ / セルトリ細胞 / 乳腺 / 形質転換

Research Abstract

本研究の期間内に完了した主な実験計画は以下の通りである。1)ラムダファージを用いたシバヤギのゲノム遺伝子ライブラリーの作成が完了した。2)ヒトY染色体ライブラリーから単離したヒトSRYプローブおよび、各種哺乳類のSRYに共通と考えられるHMG Box部分の塩基配列を用いてプライマーを設計し、これを用いてシバヤギのゲノムSRY構造遺伝子の単離を試み、複数の陽性クローンを得ることができた。(舘、中込)。3)その一つについて、塩基配列を決定したところ、シバヤギSRY遺伝子のプロモーター領域であることが明らかになった。(舘、東條、田中)。4)マウスのセルトリ細胞起源の培養細胞株TM-4を用いて、ヒトおよびマウスSRY遺伝子のトランスフェクションによる発現の可能性を検討した。その結果、ミュラー管抑制因子(MIS)の遺伝子発現に関しては、ヒトSRYは抑制的に、マウスSRYは促進的に作用することを示唆する結果が得られた。また、P450アロマターゼ遺伝子の発現を促進するらしいことが知られた(舘、東條、田中)。5)各種正常マウス組織およびmWAP-hGHトランスジェニック(以下、Tg)マウスに於ける、内在性WAPおよび導入WAPの発現パターンを解析した。その結果、mWAPプロモーターの組織特異性が従来考えられていたほど乳腺に対して特異的に無い事が明らかになった。今後、mWAPプロモーターを用いて、Tg動物を作出する試みを行う際には、この点に十分留意する必要があると思われる。(東條、舘、高橋)。6)In vitroにおいて、高分化能を維持している培養乳腺細胞HC11を用い、長鎖型プロラクチン受容体遺伝子(cDNA)をトランスフェクトして、形質転換細胞を得る事ができた。この細胞を用い、プロラクチン受容体遺伝子の発現調節、また、プロラクチン受容体の過剰発現とβ-カゼインならびに、WAP遺伝子発現調節機構の関係を解析した。その結果、受容体分子とシグナル伝達分子との間で競合が生じ、シグナル伝達分子を持たない受容体分子が生じ、標的遺伝子の発現が見かけ上、抑制されることを示唆する結果が得られた(abortive hit model)。受容体遺伝子を用いたTg動物を作出する際に、この問題の検討が必要となろう。(舘、東條、田中)。7)シバヤギのc-kit遺伝子のクローニングと塩基配列の解析を行った。その結果、細胞内ドメインにヤギに特異的と思われるアミノ酸のインサーションがあることが明らかになった。しかし、この細胞内ドメインのアミノ酸インサーションと被毛の黒眼優性白色形質の発現との関係は確立できなかった。(舘、田中)。

Research Products

• [Publications] S.Tanaka,H.Tojo,K.Kasai,et al.: "Melanocytes fail to survive in hair bulbs of the Shiba goat(Capra hircus)with the dominant" Pigment Cell Res.7. 152-157 (1994)
• [Publications] J.Wen Y.Kawamata,et al.: "Expression of whey acidic protein(WAP)genes in tissues other than the mammary gland......" Mol.Reprod.Develop.(in press).
• [Publications] A.Ikeda,S.Matsuyama,et al.: "Changes in endogenous growth hormone secretinand onset......" Endoerine J.(in press).
• [Publications] Lu R.-Z,S.Matsuyama,et al.: "Developmental expression of activin/inhibin bA,bB and a subunits, and activin receptor......" Biol.Reprod.49. 1163-1169 (1993)
• [Publications] Nakagawa Y,H.Takeuchi,et al.: "Restriction fragment length polymorphisms of the CYP11B1 gene in the......" Jap.J.Human Genet.38. 203-207 (1993)
• [Publications] Tsutsumi O.,Iida T.et al.: "Intact sex determining region Y(SRY)in a patient with XY pure gonadal dysgenesis and a twin brother." Endocrine Journal. 41. 281-285 (1994)