遺伝子クローニングによる抗C型肝炎ウイルスのヒトモ

1994 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 05454185
• Research Institution: Nihon University
• Principal Investigator: 江角 真理子 日本大学, 医学部, 助教授 (30167291)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 杉谷 雅彦 日本大学, 医学部, 講師 (40187654)
• Keywords: C型肝炎ウイルス / モノクロナル抗体 / 遺伝子クローニング / 中和抗体

Research Abstract

C型肝炎ウイルスは未だ適当なウイルス感染増殖系がないために、中和抗体の検出が極めて困難な状態にある。また患者の病態、感染動態を見る限り、中和抗体がヒトでは誘導され難いか、またはウイルスの高変異によるescape mutantの出現によつてウイルスが中和抗体からうまく逃れているため、持続感染が成立すると考えられる。そこで、本研究では他種の動物を免疫することにより、中和抗体をヒト以外から見いだすことを目的として、以下に示す実験を行った。
まず中和抗体の候補として、2つのエンベロープ糖蛋白E1とE2に対する抗体を作製した。昆虫細胞で発現させた組み換えエンベロープ糖蛋白E1,E2およびhypevariable region(HVR)1ペプチドを、種々の系統のマウスおよびチンパンジーに免疫し抗血清を得た。E1,E2で免疫したマウスおよびチンパンジーには、抗E1,抗E2抗体が高抗体価で誘導され、複数のlinearエピトープに対する抗体が検出された。これらは、HCV自然感染経過における患者血清やHCV感染実験におけるチンパンジー血清には見られない、強い抗体responseであった。ウイルスcaptureアッセイは、これらの抗体とHCVを反応後、二次抗体を加え、免疫沈降分画と上清に存在するHCVをRT-PCRにて半定量した。これら免疫抗血清の中にウイルスを一部captureできる抗体が見出された。抗HVR1抗体よりも抗E1抗体、抗E2抗体の方が、capture活性が検出されやすい傾向にあった。しかし、エンベロープ糖蛋白E1,E2およびHVR1ペプチドを免疫したチンパンジーでは、C型肝炎ウイルスの感染を防御し得なかった。発症の軽減及び早期化が観察されたことから、免疫による病態抑制効果は期待できるものと思われる。HVR1配列に拘束されない中和抗体の検索は、中和抗体とウイルスcapture抗体との関連を明らかにするとともに、チンパンジーを用いた中和抗体アッセイで検索していく必要がある。

Research Products

• [Publications] 江角真理子 他: "Hepatitis C virus and liver diseases." Pathology International. 44. 85-95 (1994)
• [Publications] 平賀正治 他: "Expression of HCV core protein in Escherichia coli and the establishment of ELISA system." International Hepatology Communications. 2. 37-42 (1994)
• [Publications] 大原守貴 他: "Direct PCR of whole blood and hair shafts by microwave treatment." Biotechniques. 17. 726-728 (1994)
• [Publications] 江角真理子: "病気とくすり C型肝炎" 薬局. 45. 657-662 (1994)
• [Publications] 江角真理子 他: "C型肝炎ウイルスワクチン-開発は可能か-" nanoGIGA. 3. 995-1000 (1994)
• [Publications] 江角真理子: "C型肝炎ウイルスとそのゲノタイプ." 臨床成人病. 24. 701-708 (1994)