1995 Fiscal Year Annual Research Report

新生児マルチプルカルボキシラーゼ欠損症の病因遺伝子と変異遺伝子発現蛋白の解析

Research Project

Project/Area Number	05454282
Research Institution	TOHOKU UNIVERSITY
Principal Investigator	成澤邦明東北大学, 医学部, 教授 (90004647)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	鈴木洋一東北大学, 医学部, 助手 (80216457) 呉繁夫東北大学, 医学部, 助手 (10205221) 松原洋一東北大学, 医学部, 助教授 (00209602)
Keywords	ホロカルボキシラーゼ合成酵素 / ビオチン依存症 / マルチプルカルボキシラーゼ欠損症 / PCR-SSCP / HCScDNA / HCScDNAの発現
Research Abstract	ホロカルボキシラーゼ合成酵素(HCS)はビオチンをカルボキシラーゼに結合する反応を触媒する酵素で、本酵素の欠損症はビオチン依存性マルギプルカルボキシラーゼ欠損症と呼ばれる病態を呈する。我々は、ヒトHCScDNAのクローニングに成功し、HCSとその欠損症の分子レベルでの研究を進めている。先ず、患者の遺伝子解析を容易にするために蛍光プライマーを用いたPCR-SSCP法を確立した。患者線維芽細胞よりcDNAを合成し、片方或いは両方に蛍光標識を付けたプライマーセットでHCScDNAを12断片に分割するようにPCRを行った。非変性ゲル下、自動蛍光シークエンサーで電気泳動を行い、正常に比べて異なる泳動度を示した断片をスクリーニングした後、異常断片について塩基配列を決定した。この方法で、日本人患者からL237P変異とdelG1067変異が同定された。これらの変異は日本人に高頻度にみられ、10アレル中前者が5アレル、後者が3アレルであった。日本人患者では両変異で病因アレルの80%が説明できることから、両変異は遺伝子診断に有用と思われる。西欧人5例の解析ではV333E変異、T4621変異、G581S変異、delC2279変異、delT1876変異、68塩基欠失(1740-1807)が同定され、高頻度変異がないこと、日本人と共通変異がないことが明らかとなった。発現実験では、cDNAを発現ベクターに組み込み、それをSV40で樹立したHCS欠損症由来ヒト線維芽細胞に導入し、HCS活性及びウエスタンブロットを検討した。L237P変異を持つcDNAからの発現蛋白は量的に対照と殆ど変わらないがHCS活性は全くなく、この変異が質的異常をきたす変異であることを示した。

Research Products

(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] Suzuki,Y.et al.: "Isolation and characterization of mutations human holocarboxylase synthetase cDNA." Nature Genetics. 8. 122-128 (1994)
[Publications] Chiba,Y.et al.: "Purification and properties of bovine liver holocarboxylase synthetase" Archives of Biochemistry and Biophysics. 313. 8-14 (1994)
[Publications] Aoki,M.et al.: "Variance of age at onset in a Japanese family with amyotrophic lateral Sclerosis assosiated with a novel Cu/Zn superoxide dismutase mutation." Annals of Neurology. 37. 676-679 (1995)
[Publications] Ohura,T.et al.: "Progressive pulmonary hypertension:a fatal complication of type 1 glycogen storage disease." J.Inher.Metab.Dis.18. 361-362 (1995)
[Publications] Aoki,Y.et al.: "Molecular analysis of holocarboxylase synthetase deficiency:a missence mutation and single base deletion are predominant in Japanese patients" Biochemica et Biophysica Acta. 1272. 168-174 (1995)
[Publications] Suzuki,Y.et al.: "Enzymatic diagnosis of holocarboxylase synthetase deficiency using apocarboxyl carrier protein as a substrate." Clinica Chemica Acta. (in press).

1995 Fiscal Year Annual Research Report

新生児マルチプルカルボキシラーゼ欠損症の病因遺伝子と変異遺伝子発現蛋白の解析

Principal Investigator

成澤 邦明 東北大学, 医学部, 教授 (90004647)

Research Products

[Publications] Suzuki,Y.et al.: "Isolation and characterization of mutations human holocarboxylase synthetase cDNA." Nature Genetics. 8. 122-128 (1994)

[Publications] Chiba,Y.et al.: "Purification and properties of bovine liver holocarboxylase synthetase" Archives of Biochemistry and Biophysics. 313. 8-14 (1994)

[Publications] Aoki,M.et al.: "Variance of age at onset in a Japanese family with amyotrophic lateral Sclerosis assosiated with a novel Cu/Zn superoxide dismutase mutation." Annals of Neurology. 37. 676-679 (1995)

[Publications] Ohura,T.et al.: "Progressive pulmonary hypertension:a fatal complication of type 1 glycogen storage disease." J.Inher.Metab.Dis.18. 361-362 (1995)

[Publications] Aoki,Y.et al.: "Molecular analysis of holocarboxylase synthetase deficiency:a missence mutation and single base deletion are predominant in Japanese patients" Biochemica et Biophysica Acta. 1272. 168-174 (1995)

[Publications] Suzuki,Y.et al.: "Enzymatic diagnosis of holocarboxylase synthetase deficiency using apocarboxyl carrier protein as a substrate." Clinica Chemica Acta. (in press).

成澤邦明東北大学, 医学部, 教授 (90004647)