1993 Fiscal Year Annual Research Report
血液流動性維持に重要な血管内皮ヘパリン様抗血栓性物質の病態解析
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05454330
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
斎藤 英彦 名古屋大学, 医学部, 教授 (20153819)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
松岡 明 名古屋大学, 医学部, 医員
小嶋 哲人 名古屋大学, 医学部, 助手
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| Keywords | 血液流動性 / 血管内皮 / ヘパラン硫酸 / Ryudocan / cDNA / alternative polyadenylation / ヒト染色体20q12 |
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| Research Abstract |
われわれは、血液流動性維持に重要な抗凝固性血管内皮へパラン硫酸(Ryudocan)のヒト分子コア蛋白cDNAをクローニングを試み、ヒト臍帯静派内皮細胞cDNAライブラリーより全長ヒトRyudocan cDNAのクローニングに成功した。クローニングされたヒトRyudocan cDNAは、全長2610bpでラット分子と67.0%の相同性を示した。cDNAから予想されるヒトRyudocanは198アミノ酸残基から成り、ラット分子とアミノ酸のレベルで79.3%の相同性をもち、その細胞外ドメインに4ケ所のヘパラン糖鎖の付着予想部位であるSG配列を認めた。また、各種組織のRNAを用いたNorthern blot analysisではヒトRyudocanのmain mRNAは2.7kbの大きさをもち、肺、肝臓、骨格筋、および腎臓に比較的よく発現されていた。1.9kbのminor mRNA signalも肺、骨格筋などで認められたが、精査の結果これはposition 1806でのalternative polyadenylationに起因するものであることが判明した。また、ヒトにおける本分子発現の各種細胞および組織特異性を検討し、Ryudocanのヒト染色体遺伝子座の同定を試み、Fluorescence in situ hybridization(FISH)法による遺伝子座検索の結果、ヒトRyudocan遺伝子はヒト染色体20q12にmappingされた。現在、cDNAのコードするアミノ酸配列情報をもとにヒトRyudocan分子に対する特異抗体を作製中で、これを正常各組織および各種血管病変での組織免疫学的な本分子存在様式の検討、さらにはヒトRyudocan血中濃度の測定法確立にも用い、各種血管障害時での本分子動態とその病態との関連の解析に応用し、様々な内皮細胞機能におけるRyudocan分子の役割解析を進めて行く予定である。
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[Publications] Kojima,T.: "Human ryudocan core protein:molecular cloning and charcterization of the cDNA,and chromosomal localization of the gene." Biochem Bioph Res Comm. 190. 814-822 (1993)
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[Publications] Yamazaki,T.: "A phenotypically neutral dimorphism of protein S:the substitution of Lys 155 Glu in the second EGF domain predicted by and a to G base exchange in the gene." Thromb Res. 70. 395-403 (1993)
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[Publications] Matsushita,T.: "Construction and its expression of a new retroviral vector containing a human blood coagulation factor IX cDNA." Thromb Res. 69. 387-393 (1993)
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[Publications] Yamamoto,K.: "Impaired secretion of the elongated mutant of protein C(protein C-Nagoya):Molecular and cellular basis for hereditary protein C deficiency." J Clin Invest. 90. 2439-2446 (1993)
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[Publications] Yamamoto,K.: "Homozygous protein C deficiency:indentification of a novel missense mutation that causes impaired secretion of the mutant protein C." J Lab Clin Med. 119. 87-95 (1992)
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[Publications] Sugiura,I.: "Three distinct point mutations of the von Willebrand factor gene in four patients with type IIA von Willebrand disease." Thromb Haemost. 67. 612-617 (1992)
