1993 Fiscal Year Annual Research Report
ヒト細胞へのサイトカイン遺伝子移入とそのヒト癌治療への応用に関する基礎的研究
Project/Area Number |
05454355
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Research Institution | Kyushu University |
Principal Investigator |
秋吉 毅 九州大学, 生体防御医学研究所, 教授 (70038660)
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
中島 秀彰 九州大学, 生体防御医学研究所, 助手 (20253528)
井上 裕 九州大学, 生体防御医学研究所, 助手 (90203249)
有永 信哉 九州大学, 生体防御医学研究所, 助手 (70151181)
上尾 裕昭 九州大学, 生体防御医学研究所, 助教授 (70150430)
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Keywords | 遺伝子治療 / 遺伝子移 / インターリューキン2 / レトロウイルスベクター / SCIDマウス |
Research Abstract |
本年度は以下の基礎的検討を行った。 1.、サイトカイン(特にIL2)cDNAをplasmid vector(pRc/CMV)を用いて、ヒト胃癌株化細胞に移入するtransfection assayを行うこと、およびその移入効率、安定性、DNA、蛋白 レベルでの解析等行った。その結果、ある程度の効率で移入が認められサイトカン産生も認められたが、その期間は短期間(約60日)であった。したがって、より効率よく長期にわたる移入を行うには、viral vectorを用いることが必須と考えられた。 2.pBlueScriptに組み込まれたIL2cDNAを制限酵素で切りだし、LTRpromotorを持つレトロウイルスベクターpGEM5 neoに組換えた。この際、IL2cDNAの3'下流にあるpoly A signalを除くための工夫を行った。更に各種サイトカンcDNA(IL2,TNF-a,IFN-g)の組み換えを試みるとともに、現在packaging cellPA317へのtransfection assayを進めているところである。 3.無血清培地を用い、ヒト癌、特に各種消化器癌の初代培養を試み、4〜5種類の培養を得ている。更にSCIDマウスを併せて検討したところSCIDマウスを用いることによりより効率よく、培養株が得られる可能性が示唆された。この点についてさらに検索中である。
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[Publications] S.Arinaga,T.Akiyoshi etal: "Cytotoxic cell function and phenotypic analysis of peripheral blood monocular cells in cancer patients treated with low dese IL2 and MMC" Canur Imrnunology Immrno thuapry. 37. 220-226 (1993)
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[Publications] N.Karimine,T.Akiyoshi etal: "Lynys□ekine activated killer cell function of peripheral blood monocular cells, splean cells,and regional lymhaide cells in gastric cancer patients" Clinical Experimental Immuralogy. inpress. (1994)
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[Publications] H.Ueo,T.Akiyoshi etal: "chenopreveuti□ effects of tanoxiten in ethyl methane sulphonate induced rat mammary carcinogenesis" Cancer Letlers. 71. 19-24 (1993)
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[Publications] H.Ueo,T.Akiyoshi etal: "The production of interleukin-6 at operative Wound sites in surgical patients" Surgery Gynecology Obsteuis. in press. (1994)
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[Publications] H.Ueo,T.Akiyoshi etal: "Areliable operative procedure for preparing a sufficietly nourished gastric tube for esophageal reconstruetoin" American Journal of Surgery. 165. 273-276 (1993)
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[Publications] 足立昌□,秋吉毅 他: "末梢血単球のmRNAの定量的測定と臨床応用" 日本外科学会雑誌. 94. 1124-1124 (1993)