1993 Fiscal Year Annual Research Report
神経伝達物質受容体の活性化によるzif268遺伝子の発現調節と同遺伝子産物の機能
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05454672
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
SAFFEN DAVID 東京大学, 医学部(医), 講師 (50231329)
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| Keywords | zif268 / NGF / carbachol / MAPK / raf-1 / dominant-negative / 遺伝子発現 / PC12D |
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| Research Abstract |
(1)ラット由来zif268遺伝子のプロモーター領域の下流にβ-ガラクトシダーゼ(β-gal)レポーター遺伝子を組み込んだプラスミドを作製した。(2)PC12細胞の亜種であるPC12D細胞をNGFやcarbacholで刺激した場合、MAPキナーゼおよびraf-1キナーゼが迅速に活性化されることをウエスタンブロット法や、in vitroとin gelキナーゼ測定法等により明らかにすることができた。NGF刺激の場合と違い、carbacholによるMAPキナーゼやraf-1キナーゼの活性化はC-キナーゼを必要とすることも証明した。予想以外なことには、NGFやcarbacholの刺激によるraf-1キナーゼの活性化やraf-1キナーゼの燐酸化は同刺激によるMAPキナーゼの活性化と燐酸化より遅く起こることが判明した。この結果よりPC12D細胞には、MAPキナーゼの上流にRaf-1キナーゼの変わりに働く他のキナーゼが存在することが示唆される。そのキナーゼの候補者としては昨年Johnsonらにより発見されたMEKKが考えられる。
3)zif268遺伝子の発現誘導やMAPキナーゼの活性化に関するRaf-1キナーゼの役割を明らかにするために、Raf-1キナーゼのdominant-negative mutantをコードする発現ベクターを作製した。
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Research Products
(2 results)
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[Publications] 海老原達彦,伊藤和光,DAVID SAFFEN: "PC12Dにおけるムスカリン受容体活性化によるzif268の発現" 生化学. 65. 1000 (1993)
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[Publications] T.Ebihara,K.Ito,D.SAFFEN: "Partially independent pathways mediate induction of Transcription factor zif268 mRNA in PC12D cells" Soc,Neurosci,Abstr.19. 697 (1993)
