1994 Fiscal Year Annual Research Report

受容体応答を指標とした遺伝子転写活性のリアルタイム計測法の研究

Research Project

Project/Area Number	05557003
Research Institution	FACULTY OF MEDICINE,UNIVERSITY OF TOKYO
Principal Investigator	高橋國太郎東京大学, 医学部(医), 教授 (10010034)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	岡村康司東京大学, 医学部(医), 助手 (80201987)
Keywords	転写活性 / レポータ遺伝子 / イオンチャネル / 非侵襲的 / ホヤ胚 / 単離胚細胞 / ホヤNaチャネル / RNA注入
Research Abstract	従来、遺伝子の転写調節機構は、その5'端上流にある転写制御領域の下流にβ-GAL,CAT,Luciferase等酵素の遺伝子をレポータとして繋いだDNAを外来性に導入し、発現した酵素活性や抗原性を検出して解析されてきた。しかし、これらの方法では、転写活性を検出した細胞について生理的機能を解析することができない。イオンチャネルは、生細胞で実時間で電気的に定量しうる膜蛋白であり、特に受容体チャネルはアゴニスト依存性に開き、細胞内イオン濃度変化を蛍光指示薬等により非侵襲的に測定できる。当研究ではホヤ胚割球をモデル系として、チャネルの翻訳領域を各種遺伝子の転写制御領域に連結して発現させ、細胞の応答を電気-光学的手法により検出し、非侵襲的に転写活性を定量するシステムを開発する。平成6年度の成果(1)RSVヴィルスのプロモータあるいはホヤアクチン遺伝子の転写調節領域の下流に連結したイオンチャネル遺伝子をもちいたホヤ胚での発現は再現性に乏しいので、原因を探るためcDNAよりmRNAを合成して発現させることにした。(2)従来,ホヤ胚でのmRNA注入による発現は困難とされていたが,thymidine kinase mRNAの5'端を連結すると高効率でβ-galactosidaseを発現することがわかった.そこで(3)同じ5'端をホヤNaチャネルに連結した結果、チャネルの発現量が安定し,ホヤ胚細胞が発現系として有用であることがわかった.(4)ホヤ神経割球で内因性Naチャネルと区別するため、アミノ酸配列を変換してTTX感受性としたNaチャネルを作成し、これより合成したmRNAを注入している。(5)Ca透過性をもつラットグルタミン酸受容体GluR1遺伝子をアクチン遺伝子の転写調節領域あるいはRSVプロモータに連結したレポータ遺伝子を作製中である。

Research Products
(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] Saitoe M: "Gap junctional disappearance related to neuronal differentiation in acleavage-arrested ascididan 8-cell blastomere pair." Japanese Journal of Physiology. 44. S44 (1994)
[Publications] Inazawa T: "Basic fibroblast growth factor causes neural induction on ascidian ectodermal blastomeres in the same manner as a natural inducer." Japanese Journal of Physiology. 44. S158 (1994)
[Publications] TAKAHASHI K: "Expression of ion channels and neural differentiation in a simple system of two interacting ascidian embryonic cells." Third Congress of Federation of Asian and Oceanian Physiological Societies,Shanghai,November, Abstract. p21 (1994)
[Publications] TAKAHASHI K: "Neuronal excitability is induced by cell-cell interactions during early embryogenesis." Perspectives of Developmental Neurobiology. (in press). (1995)
[Publications] Saitoe M: "Neuronal expression in cleavage-arrested ascidian blastomeres reguires gap iunctional uncoupling from neighbouring cells." Journal of Physiology(London). (in press). (1995)
[Publications] Okamura Y: "Neural Expression of a sodium channel gene requires cell-specific interactions." Neuron. 13. 937-948 (1994)

1994 Fiscal Year Annual Research Report

受容体応答を指標とした遺伝子転写活性のリアルタイム計測法の研究

Principal Investigator

高橋 國太郎 東京大学, 医学部(医), 教授 (10010034)

Research Products

[Publications] Saitoe M: "Gap junctional disappearance related to neuronal differentiation in acleavage-arrested ascididan 8-cell blastomere pair." Japanese Journal of Physiology. 44. S44 (1994)

[Publications] Inazawa T: "Basic fibroblast growth factor causes neural induction on ascidian ectodermal blastomeres in the same manner as a natural inducer." Japanese Journal of Physiology. 44. S158 (1994)

[Publications] TAKAHASHI K: "Expression of ion channels and neural differentiation in a simple system of two interacting ascidian embryonic cells." Third Congress of Federation of Asian and Oceanian Physiological Societies,Shanghai,November, Abstract. p21 (1994)

[Publications] TAKAHASHI K: "Neuronal excitability is induced by cell-cell interactions during early embryogenesis." Perspectives of Developmental Neurobiology. (in press). (1995)

[Publications] Saitoe M: "Neuronal expression in cleavage-arrested ascidian blastomeres reguires gap iunctional uncoupling from neighbouring cells." Journal of Physiology(London). (in press). (1995)

[Publications] Okamura Y: "Neural Expression of a sodium channel gene requires cell-specific interactions." Neuron. 13. 937-948 (1994)

高橋國太郎東京大学, 医学部(医), 教授 (10010034)