1995 Fiscal Year Annual Research Report
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05557065
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
白倉 良太 大阪大学, 医学部, 教授 (00116047)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
中上 辰芳 日本ハム株式会社, 中央研究所, 主任
重久 保 日本ハム株式会社, 中央研究所, 副主査
中田 精三 大阪大学, 医学部, 助手 (50116068)
島崎 靖久 大阪大学, 医学部, 助教授 (60116043)
松田 暉 大阪大学, 医学部, 教授 (00028614)
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| Keywords | 異種移植 / 補体 / トランスジェニック / DAF(CD55) / MCP(CD46) / CD59 |
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| Research Abstract |
補体制御因子のc-DNAをブタ血管内皮細胞にtransfectionすることによる、異種細胞上でのヒト補体の制御効果についてはかなり明らかになった。
ブタ血管内皮細胞は大動脈より抽出し、cell line化した。Transfectionにはlipofectine法を用いた。
1)C3stepでの制御効果:MCP(CD46)は通常ヒト臍帯静脈発現量で20-30%、異種細胞上でヒト補体を抑制した。DAF(CD55)は同じく通常発現量で、ヒト補体50%程度抑制した。また、DAFに関しては高発現下では80%以上ヒト補体を抑制可能であった。MCP/DAFhybridに関しては、MCPより有効に補体を制御したが、DAF単独との比較はできなかった。
2)Late step:ブタの血管内皮細胞はヒト補体のC8stepで障害されるため、CD59はその効果を十分発揮できない事が判明したが、高発現下では70%程度ヒト補体を抑制し得た。
TRANSGENIC MICE
補体制御因子MCP及びDAFをmouseにtransgenicした。方法はmanupilatorを使用し、通常の方法で行い、FounderはPCRおよびSouthern blotにて確認し、発現の判定はF1にておこなった。まずPME18s;SV40のpromoterにcDNAを挿入した群ではMCP,DAFとも数Line作成したが、蛋白の発現は確認できなかった。次にpCAGGS;Beta-actineのpromoterを使った群ではDAF(CD55)に関しては発現をみたが、MCP(CD46)に関しては10lineとも発現をみず、3UTの長さで発現が制御されている事が判明した。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] S.Miyagawa: "Test for ability of decay-accelerating factor(DAF,CD55)and CD59to alleviate complement-mediated damage of xeno-erythrocytes." Scand.J.Immunol.38. 37-44 (1993)
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[Publications] S.Miyagawa: "Prolonging discordant xenograft survival with anticomplement reagents,K76COOH and FUT175." Transplantation. 55. 709-713 (1993)
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[Publications] S.Miyagawa: "Possibility for prevention of hyperacute rejection by DAF and CD59 in xenotransplantation." Transplant.Proc.26. 1235-1238 (1994)
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[Publications] S.Miyagawa: "Effects of transfectant molecules,MCP,DAF,and MCP/DAF hybrid on xenogenic vascular endotherium." Transplant.Proc.26. 1253-1254 (1994)
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[Publications] Shuji Miyagawa: "Effects of transfected complement regulatory proteins,MCP,DAF,and MCP/DAF hybrid on complement-mediated swine endotherial cell lysis." Transplantaion. 58. 834-840 (1994)
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[Publications] S.Miyagawa: "Effect of transfected MACIF(CD59)on complement mediated swine endothelial cell lysis,comparing with those of MCP(CD46)and DAF(CD55)." Transplant.Proc.27. 328-329 (1995)
