1994 Fiscal Year Annual Research Report
機能性食品開発のための動物細胞の有用物質生産性の遺伝子工学的増強
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05660144
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| Research Institution | KYUSHU UNIVERSITY |
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Principal Investigator |
白畑 實隆 九州大学, 農学研究科, 助教授 (90154377)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
立花 宏文 九州大学, 農学研究科, 講師 (70236545)
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| Keywords | 動物細胞生産性増強 / プロモーター活性化 / ガン遺伝子 / ras / ElA / CMVプロモーター / ヒトインターロイキン-6 / 遺伝子増幅 |
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| Research Abstract |
動物細胞の組換えタンパク質生産性を増強するために、ガン遺伝子産物による特定のプロモーター活性化作用を利用して細胞の組換えタンパク質の生産性を増強する系、Oncogene Activated Production(OAP)システムを開発し、組換えタンパク質高発現細胞株の育種を試みた。
まずOAPシステムの有効性を一過性発現実験で検討したところ、明らかにガン遺伝子産物による生産性増強効果が確認された。つぎにBHK‐21細胞株に各種ガン遺伝子をdhfr遺伝子とともに導入し一段階の遺伝子増幅を行ったところ、c‐Ha‐rasガン遺伝子を導入したとき、ヒトサイトメガロ前初期プロモーター制御下でのヒトインターロイキン-6(hIL‐6)の生産性が約35倍まで増強され、この効果はElAガン遺伝子を導入することによりさらに10倍増強された。他のc‐fos、v‐jun、v‐myb、そしてc‐mycガン遺伝子にはc‐Ha‐rasガン遺伝子との相乗効果は見られなかった。このc‐Ha‐rasとElAガン遺伝子の生産性増強効果について検討したところ、c‐Ha‐rasはプロテイン・キナーゼCを介してNF‐κBの転写活性化を促進しており、ElAはc‐Ha‐rasに依存した転写活性化作用に関与していると推定された。また、他のヒト型組換えタンパク質、例えばエリスロポエチン、顆粒球コロニー刺激因子、モノクローナル抗体などの発現においてもc‐Ha‐rasによる生産性増強効果が確認された。
以上のように、OAPシステムを用いることにより組換えタンパク質高発現動物細胞株の育種を迅速かつ簡便に行えることが明かとなった。
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Research Products
(4 results)
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[Publications] K.Osada: "Enhancement of interferon‐β production with sphingomyelin from fermonted milk" Biotherapy. 7. 115-123 (1994)
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[Publications] K.Teruya: "Ras amplification in BHK‐21 cells produces a host oll line for further rapid establishment of recombindnt protein hyper‐producing oll lines" Biosc.Biotech,Biochem. 59. 341-344 (1995)
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[Publications] S.Shirahata: "ElA and ras oncogenes syne rgistically enhdnce recombinant protein production under control of the cytomegalbvirus promoter in BHK‐21 cells" Biosc.Biotech.Biochem. 59. 345-347 (1995)
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[Publications] T.Yano: "Ras oncogene ehhances the production of a recombinaet protein regulated by cytomegalovirus promoter in BHK‐21 cells" Cy to technoligy. (印刷中). (1995)
