新鶏膵臓ホルモン(グルカゴン様ペプチド)の単離とその生理機能の解明

1994 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 05660328
• Research Institution: Kobe university
• Principal Investigator: 長谷川 信 神戸大学, 大学院・自然科学研究科, 教授 (60107985)
• Keywords: 鶏膵臓ホルモン / グルカゴン様ペプチド / アフィニティクロマトグラフィー / 初代培養肝細胞 / 遊離脂肪細胞 / 脂質代謝系 / 炭水化物代謝系 / グルカゴン

Research Abstract

[研究目的] 申請者らは、鶏膵臓cDNAライブラリーからグルカゴンcDNAをスクリーニングする過程で、グルカゴン前駆体cDNA内にグルカゴン様ペプチド(Glucagon Like Peptide、以下GLPと略す)をコードする塩基配列を見出した。既に、哺乳動物や魚類においてGLPの存在が確認されていることから、鶏膵臓からGLPを単離し同定できる可能性は極めて高いと判断される。
そこで、本研究の目的は、平成5年度において、まず、酵素的DNA増幅法(Polymerase Chain Reaction法、以下PCR法と略す)に従って鶏GLPをコードするDNAを増幅し、つぎに、この増幅されたDNAを用い酵母を宿主として生理活性を有するGLPを大量に生合成する。そして、生合成されたGLPに対する単クローン抗体を作製する。さらに、平成6年度において、作製された単クローン抗体をアフィニティークロマトグラフィーのリガンドに供することにより、鶏膵臓からのGLPの単離・同定を行う。また、平成5年度に生合成されたGLPを用いて、鶏におけるGLPの生理機能についてin vivo並びにin vitro条件下でグルカゴンのそれと比較検討する。
[本年度の研究成果]
1)鶏膵臓からのGlucagon Like Peptideの単離・同定
平成5年度の「鶏Glucagon Like Peptideの単クローン抗体の作成」で得た単クローン抗体をリガントとしCNBr-活性化セファロース4Bを担体としたアフィニティークロマトグラフィー等を利用して、Glucagon Like Peptideを鶏膵臓から単離し同定する。
2)鶏Glucagon Like Peptideの生理機能の検討
平成5年度の「酵母による鶏Glucagon Like Peptideの発現」で得たGlucagon Like Peptideを用いて、成長中の鶏に関して、静脈内投与によるin vivo実験並びに初代培養肝臓細胞及び遊離脂肪細胞を利用したin vitro実験を行ない、鶏の体内代謝系、即ち、炭水化物代謝系・脂質代謝系および蛋白質代謝系へのGlucagon Like Peptideの関与をグルカゴンのそれと比較検討する。