1993 Fiscal Year Annual Research Report

GTP結合蛋白質によるミオシン軽鎖脱リン酸化酵素(MLCP)活性調節の解明

Research Project

Project/Area Number	05670088
Research Institution	Kyoto University
Principal Investigator	森井成人京都大学, 医学部, 講師 (80220036)
Keywords	ミオシン軽鎖フォスファターゼ / rho蛋白質 / GTP結合蛋白質 / 蛋白質チロシンリン酸化 / チロシンキナーゼ / ADPリボシル化 / 情報伝達
Research Abstract	平滑筋スキンド標本を用いた解析系でGTP依存性のCa感受性の亢進がrho蛋白質の特異的ADPリボシル化酵素であるC3酵素によって阻害されることから、rho蛋白質を介するMLCPの活性調節の可能性が考えられた。そこで今回、非筋細胞ホモジネートを用いて無細胞系で解析した。予め[^<32>P]ATPでリン酸化した砂嚢筋ミオシン軽鎖を基質として、ラット脳、Swiss3T3線維芽細胞、血小板ホモジネートを用いて検討した。1mM以上のGTP,GDPの添加はMLCP活性の低下をもたらしたが、これ以下の濃度では明らかな活性変化は観察されなかった。rho蛋白質ならびに他のGTP結合蛋白質のKd値(10-50nM)を考慮すると要求するヌクレオチドが高濃度であること、両者の効果に差が認められないことから非特異的抑制であると考えられた。次に予めGTPあるいはGDPと結合させたrho蛋白質を添加し検討したがMLCP活性の変化は検出されなかった。以上の結果からrho蛋白質がMLCPの活性を直接担っている可能性は少ないと結論された。そこで培養Swiss3T3細胞をもちいてrho蛋白質の関与する蛋白質リン酸化調節について検討した。C3酵素の存在下で培養したSwiss3T3細胞(C3酵素処理細胞)と非処理細胞を調製し、rho蛋白質の活性化刺激因子であることが報告されているLysophosphatidic acid(LPA)で刺激した。今回、C3酵素処理によるチロシンリン酸化の変化を解析した。LPA刺激により増強するチロシンリン酸化蛋白質のうち分子量130-110K,88K,72K,43Kの蛋白質(群)のリン酸化がC3酵素処理で減弱した。これらの蛋白質のうちp130-110の1つはfocal adhesionキナーゼ(FAK)であり、p43KはMAPキナーゼ(ERK2)であることが判明した。また、C3酵素処理細胞では抗PI3キナーゼp85抗体で共沈する180Kのチロシンリン酸化蛋白質バンドの減弱とLPAによるPI3キナーゼの活性化の阻害が認められた。これより、刺激因子→膜受容体・G蛋白質→rho蛋白質→チロシンキナーゼの情報伝達系の存在が示唆された。

Research Products
(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] T.Tminaga et al.: "Inhibition of PMA-induced,LFA-1-dependent lymphocyte aggregation by ADP-ribosylation of the small molecular weight GTP-binding protein,rho." J.Cell Biol.130. 1529-1537 (1993)
[Publications] N.Kumagai et al.: "ADP-ribosylation of rho p21 inhibits lysophosphatidic acid-induced protein phosphorylation and phosphatidylinositol 3-kinase activation in" J.Biol.Chem.268. 24535-24538 (1993)
[Publications] M.Yamamoto et al.: "ADP-ribosylation of the rho gene product by botulinum C3 exoenzyme causes Swiss 3T3 cells to accumulate in the G1 phase of the cell cycle." Oncogene. 8. 1449-1455 (1993)
[Publications] N.Morii et al.: "rho-GAP of 28 KDa(GAP2),but not of 190 KDa(p190),requires Asp^<65> and Asp^<67> of rho GTPase for its activation." J.Biol.Chem.268. 27160-27163 (1993)
[Publications] I.Mabuchi et al.: "A rho-like protein is involved in the organization of the contractile ring in dividing sand dollar eggs." Zygote. 1(in press). (1993)
[Publications] N.Kumagai et al.: "Lysophosphatidic acid induces tyrosine phosphorylation and activation of MAP-kinase and focal adhesion kinase in cultures Swiss 3T3 cells." FEBS Lett.329. 273-276 (1993)

1993 Fiscal Year Annual Research Report

GTP結合蛋白質によるミオシン軽鎖脱リン酸化酵素(MLCP)活性調節の解明

Principal Investigator

森井 成人 京都大学, 医学部, 講師 (80220036)

Research Products

[Publications] T.Tminaga et al.: "Inhibition of PMA-induced,LFA-1-dependent lymphocyte aggregation by ADP-ribosylation of the small molecular weight GTP-binding protein,rho." J.Cell Biol.130. 1529-1537 (1993)

[Publications] N.Kumagai et al.: "ADP-ribosylation of rho p21 inhibits lysophosphatidic acid-induced protein phosphorylation and phosphatidylinositol 3-kinase activation in" J.Biol.Chem.268. 24535-24538 (1993)

[Publications] M.Yamamoto et al.: "ADP-ribosylation of the rho gene product by botulinum C3 exoenzyme causes Swiss 3T3 cells to accumulate in the G1 phase of the cell cycle." Oncogene. 8. 1449-1455 (1993)

[Publications] N.Morii et al.: "rho-GAP of 28 KDa(GAP2),but not of 190 KDa(p190),requires Asp^<65> and Asp^<67> of rho GTPase for its activation." J.Biol.Chem.268. 27160-27163 (1993)

[Publications] I.Mabuchi et al.: "A rho-like protein is involved in the organization of the contractile ring in dividing sand dollar eggs." Zygote. 1(in press). (1993)

[Publications] N.Kumagai et al.: "Lysophosphatidic acid induces tyrosine phosphorylation and activation of MAP-kinase and focal adhesion kinase in cultures Swiss 3T3 cells." FEBS Lett.329. 273-276 (1993)

森井成人京都大学, 医学部, 講師 (80220036)