1993 Fiscal Year Annual Research Report

インスリンシグナル伝達におけるフォスファチジル・イノシトール-3キナーゼの役割

Research Project

Project/Area Number	05670128
Research Institution	The University of Tokushima
Principal Investigator	林日出喜徳島大学, 酵素科学研究センター, 助手 (10218589)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	村上尚徳島大学, 酵素科学研究センター, 助手 (40210009)
Keywords	PI-3キナーゼ / インスリンシグナル伝達 / グルコーストランスポータータイプ4
Research Abstract	本研究は、インスリンレセプターチロシンキナーゼによりチロシンリン酸化され、さらに活性化されたPI3-キナーゼがインスリンシグナル伝達のうちGLUT4の細胞膜へのtranslocationに関与するのか検討した。 GLUT4は膜を12回貫通するタンパクでインスリンの標的細胞では通常細胞内の膜分画に存在しているが、インスリン刺激によりこのGLUT4をのせている膜分画は細胞膜と融合することによりGLUT4は細胞膜上に現われグルコースを取り込む。我々はc-mycエピトープ14アミノ酸からなるペプチドをコードする合成DNAをGLUT4cDNA上の第1番目の細胞外ループに挿入し、それを脂肪細胞で発現させたところ、内在性のGLUT4と同様にインスリン刺激でtranslocationもするし、糖の取り込みも促進する事がわかった。またこのtranslocationはc-mycエピトープに対する抗体による細胞表面上での結合により簡単に定量的に検出することが可能となった。また脂肪細胞より扱いが簡単なチャイニーズハムスターの細胞(CHO細胞)でもこのキメラGLUT4がインスリン刺激でtranslocationすることが明らかになった。そしてこの細胞にPI3-キナーゼのinhibitorであるワートマニン(50nM)加えると、インスリンレセプター自己リン酸化、IRS-1のリン酸化が影響を受けることなくPI-3キナーゼ活性はほぼ完全に押さえられ、それと同時にGLUT4のトランスロケーションも完全に押さえられることからインスリン刺激により活性化されたPI-3キナーゼはGLUT4のtranslocationをmediateしている可能性が高いと思われる。

Research Products
(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] Nishiyama,T.,Hayashi,H.et al.: "Expression of the gene encoding the tyrosine kinase-deficient human insulin receptor in transgenic mice" Gene. (in press).
[Publications] Kanai,F.,Hayashi,H.et al.: "Insulin-stimulated GLUT4 translocation is relevant to the phosphorylation of IRS-1 and the activity of PI3-kinase" Biochem.Biophys.Res.Commun.195. 762-768 (1993)
[Publications] Kanai,F.,Hayashi,H.et al.: "Dircct demonstration of insulin-induced GLUT4 translocation to the surface of intact cells by insertion of a c-myc epitope into an exofacial GLUT4 domain" J.Biol.Chem.268. 14523-14526 (1993)
[Publications] Hayashi,H.,Ebina,Y.et al.: "The α-type 85-kDa subunit of phosphatidylinositol 3-kinase is phosphorylated at tyrosines 368,580,and 607 by the insulin receptor." J.Biol.Chem.268. 7107-7117 (1993)
[Publications] 林日出喜、蛯名洋介他: "実験医学" 羊土社, 10 (1993)
[Publications] 林日出喜、蛯名洋介他: "実験医学" 羊土社, 9 (1993)

1993 Fiscal Year Annual Research Report

インスリンシグナル伝達におけるフォスファチジル・イノシトール-3キナーゼの役割

Principal Investigator

林 日出喜 徳島大学, 酵素科学研究センター, 助手 (10218589)

Research Products

[Publications] Nishiyama,T.,Hayashi,H.et al.: "Expression of the gene encoding the tyrosine kinase-deficient human insulin receptor in transgenic mice" Gene. (in press).

[Publications] Kanai,F.,Hayashi,H.et al.: "Insulin-stimulated GLUT4 translocation is relevant to the phosphorylation of IRS-1 and the activity of PI3-kinase" Biochem.Biophys.Res.Commun.195. 762-768 (1993)

[Publications] Kanai,F.,Hayashi,H.et al.: "Dircct demonstration of insulin-induced GLUT4 translocation to the surface of intact cells by insertion of a c-myc epitope into an exofacial GLUT4 domain" J.Biol.Chem.268. 14523-14526 (1993)

[Publications] Hayashi,H.,Ebina,Y.et al.: "The α-type 85-kDa subunit of phosphatidylinositol 3-kinase is phosphorylated at tyrosines 368,580,and 607 by the insulin receptor." J.Biol.Chem.268. 7107-7117 (1993)

[Publications] 林日出喜、蛯名洋介他: "実験医学" 羊土社, 10 (1993)

[Publications] 林日出喜、蛯名洋介他: "実験医学" 羊土社, 9 (1993)

林日出喜徳島大学, 酵素科学研究センター, 助手 (10218589)