1994 Fiscal Year Annual Research Report
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05670210
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| Research Institution | Tokai University |
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Principal Investigator |
上山 義人 東海大学, 医学部, 助教授 (30072408)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
山崎 等 東海大学, 医学部, 講師 (20191273)
中村 雅登 東海大学, 医学部, 講師 (00164335)
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| Keywords | 悪性神経膠腫 / 遺伝子治療 / 上皮増殖因子受容体 / リボザイム / アンチセンスRNA |
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| Research Abstract |
悪性腫瘍に対しアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いそのmRNAを不活化する試みが近年なされているが、腫瘍に特異的なmRNAを対象とする悪性腫瘍、特に固形腫瘍、の遺伝子治療実験は少ない。悪性神経膠腫は我々が従来より報告してきた様に、特異的な異常上皮増殖因子受容体(Epidermal Growth Factor Receptor,EGFR)mRNAを発現し、臨床的悪性度との関連も見出されている。本研究は悪性神経膠腫に発現するこの異常EGFRmRNAをリボザイムab-EGFR-RIBを用いて分解し、悪性神経膠腫の遺伝子治療を行うための基礎的データを得ることを目的とする。
本年度は特にin vitroでリボザイムを作製し,in vitroでの標的mRNAに対する分解活性を確認した。さらに、このリボザイム配列を有するDNAを発現ベクター(pCEP4)に組み込み、異常EGFRcDNA-NIH3T3トランスフェクタント(ERM5-1細胞株)に導入し、細胞生物学的解析を加えた。【1】in vitroにおける異常なEGFRmRNAのリボザイムab-EGFR-RIBによる分解実験を行った。【2】このEGFR-RIBをSV40プロモーターを有する形質発現ベクターpCEP4に組み込み、pCEP4-ab-EGFR-RIBを作成した。【3】リボザイム組み換え体pCEP4-ab-EGFR-RIBを異常なEGFRmRNAを高度に発現しているERM5-1細胞株にトランスフェクトし形質導入し、ハイグロマイシン耐性形質転換株を樹立した。リボザイムab-EGFR-RIBはin vitroで生理的条件(37℃,1mMMg^<2++>,pH7.4)に近い状態で効率良くかつ特異的に異常型EGFRmRNAを分解した。またリボザイムの合成ハンマーヘッド構造部に点突然変異構造を組み込んだdisabled ribozymeは異常型EGFRmRNA分解活性を示さなかった。pCEP4-ab-EGFR-RIBを導入したERM5-1細胞は、より正常なNIH3T3細胞に類似した形態像を呈した。
これらの研究結果から異常なEGFRmRNAを標的とした悪性神経膠腫の遺伝子治療の可能性が示唆された。今後は、pCEP4-ab-EGFR-RIBを導入したERM5-1細胞をヌードマウスに移植しin vivoにおけるab-EGFR-Ribの効果を検討する予定である。
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[Publications] Yoshiyuki Abe,Yoshito Ueyama,et al.: "“Expression of the multidrug resistance gene (MDR1) in non-small cell lung cancer"" Jpn.J.Cancer Res. 85. 536-541 (1994)
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[Publications] Yoshimi Tanaka,Yoshito Ueyama,et al.,: "“Ultrastructural localization of P-glycoprotein on capillary endothelial cells in human gliomas"" Virchows Archiv. 425. 133-138 (1994)
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[Publications] Yoshiyuki Abe,Yoshito Ueyama,et al.: "“Multidrug resistance gene (MDR1) expression in human tumor xenografts."" Int.Natl.J.Oncol.5. 1285-1292 (1994)
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[Publications] Hiroshi Kijima,Yoshito Ueyama,et al.: "“Stability of ras oncogene mutation in the human tumor xenografts through serial passages"" Anticancer Res.15(in press). (1995)
