1993 Fiscal Year Annual Research Report

肝癌のトランスフェリン・エピゾーム型ベクターを用いた遺伝子治療

Research Project

Project/Area Number	05670488
Research Institution	Sapporo Medical University
Principal Investigator	越田吉一札幌医科大学, 医学部, 助手 (10231309)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	根田寛札幌医科大学, 医学部, 助手 (80237809)
Keywords	牛パピローマウイルス / ベクター / 遺伝子治療 / チミジンキナーゼ遺伝子 / 高コピー数 / 染色体外複製
Research Abstract	ウシパピローマウイルス(BPV)由来ベクターは,その受容細胞(主としてげっ歯類)においては染色体外で複製増殖しコピー数が多いことが特徴であるが,これまでヒト細胞に用いられることは困難と考えられてきた。我々は既にヒト肝癌細胞株(Mahlavu)にchicken beta-actinをプロモーターとするマーカー遺伝子(chloramphenicol acetyltransferase:CAT)を含むBPVベクターを導入したところ,高コピー数の安定した発現が得られることを明かにした(肝臓,33,600-610,1992)。このことが,他のヒト腫瘍細胞に一般化されるかどうかを検討するため,ヒト子宮頚癌細胞(HeLa)とヒト大腸癌細胞(M7609)にlipofectin法を用いて同ベクターをトランスフェクトしたところ,Mahlavu細胞と同様にHeLaおよびM7609の両細胞においてもCATの高発現が得られた。染色体への組み込みの有無,コピー数をCAT probeを用いてSouthem法で分析した結果,Mahlavu細胞と同様にgenome DNAには組み込まれておらず,コピー数も400-500個と多かった。このtransformantより複製増殖している低分子DNAをクローニングし,遺伝子導入したプラスミドとの異同を検討したところ,同一であることが確認された。さらに,in vivoにおいてもこのプラスミドがベクターとして有用であるかを検討するために,M7609を皮下注したヌードマウスの腫瘍にlipofectamine法で2mugの同DNAを1回のみ注射し,3日,7日における同腫瘍でのCATの発現を検討したところ,1unit以上のCATの発現が得られ,しかも発現量の漸減傾向は認められなかった。現在,CATをthymidine kinase遺伝子に置き換えたベクターを作製中であり,これを用いて肝癌に対する遺伝子治療のモデル実験を予定している。

Research Products

(7 results)

All Other

All Publications (7 results)

[Publications] Shigeyuki Fujii: "Augmented Systemic Immunity in Mice Implanted with Tumor Necrosis Factor-alpha Gene-transduced Meth-A Cells." Jpn.J.Cancer Res. (in print). (1994)
[Publications] Yoshikazu Koshita: "Mechanisms of Tumor Regression of TNF Gene-Transfuced Meth-A Cells Transplasned in Mice." Annals volume Gene Therapy for Neoplastic Diseases. (in print). (1994)
[Publications] Hiroshi Neda: "Successful Transfection of Biotinylated beta-Galactosidase Gene Conjugated with Transferrin into Leukemia cells and IL-2 Stimulated Lymphocytes" Annals volume Gene Therapy for Neoplastic Diseases. (in print). (1994)
[Publications] 越田吉一: "サイトカイン遺伝子導入による癌の微小環境の修飾" Biotherapy. 8. 254-259 (1994)
[Publications] Yutaka Kohgo: "Antitumor properties and possible application in gene therapy with IL-2 activated killer cells." 40. 135-143 (1994)
[Publications] 越田吉一: "エフェクター細胞および腫瘍細胞へのTNF-alpha遺伝子導入による癌免疫療法の検討" Biotherapy. 7. 46-53 (1994)
[Publications] 越田吉一: "エフェクター細胞および腫瘍細胞へのTNF-alpha遺伝子導入による癌免疫療法の検討" Biotherapy. 7. 46-53 (1994)ann Monograph on Cancer Research.

1993 Fiscal Year Annual Research Report

肝癌のトランスフェリン・エピゾーム型ベクターを用いた遺伝子治療

Principal Investigator

越田 吉一 札幌医科大学, 医学部, 助手 (10231309)

Research Products

[Publications] Shigeyuki Fujii: "Augmented Systemic Immunity in Mice Implanted with Tumor Necrosis Factor-alpha Gene-transduced Meth-A Cells." Jpn.J.Cancer Res. (in print). (1994)

[Publications] Yoshikazu Koshita: "Mechanisms of Tumor Regression of TNF Gene-Transfuced Meth-A Cells Transplasned in Mice." Annals volume Gene Therapy for Neoplastic Diseases. (in print). (1994)

[Publications] Hiroshi Neda: "Successful Transfection of Biotinylated beta-Galactosidase Gene Conjugated with Transferrin into Leukemia cells and IL-2 Stimulated Lymphocytes" Annals volume Gene Therapy for Neoplastic Diseases. (in print). (1994)

[Publications] 越田吉一: "サイトカイン遺伝子導入による癌の微小環境の修飾" Biotherapy. 8. 254-259 (1994)

[Publications] Yutaka Kohgo: "Antitumor properties and possible application in gene therapy with IL-2 activated killer cells." 40. 135-143 (1994)

[Publications] 越田吉一: "エフェクター細胞および腫瘍細胞へのTNF-alpha遺伝子導入による癌免疫療法の検討" Biotherapy. 7. 46-53 (1994)

[Publications] 越田吉一: "エフェクター細胞および腫瘍細胞へのTNF-alpha遺伝子導入による癌免疫療法の検討" Biotherapy. 7. 46-53 (1994)ann Monograph on Cancer Research.

越田吉一札幌医科大学, 医学部, 助手 (10231309)