脳微小血管の発生と組織マクロファージとの関連の検討

1993 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 05670798
• Research Institution: Fukushima Medical University
• Principal Investigator: 丹羽 真一 福島県立医科大学, 医学部・神経精神医学講座, 教授 (30110703)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 本多 真 東京大学, 医学部・(病)精神医学, 医員
• Keywords: マクロファージ / スカベンジャー受容体 / FGP細胞

Research Abstract

脳微小血管の周囲にはFGP細胞という特異な細胞が存在する。この細胞はスカベンジャー受容体などマクロファージ系の抗原を持ち,組織マクロファージと考えられる。この細胞の機能を明らかにするため以下の実験を行った。
1.マウススカベンジャー受容体蛋白の大量発現・精製とモノクロナル抗体作成
マウススカベンジャー受容体のリガンド結合部位を含む約100アミノ酸を発現ベクターに組み込みDHFRS(Dihydrofolatereductase)との融合蛋白として大腸菌で大量発現,Ni-Hisカラムで精製した。これを異種マウスに免疫しハイブリドーマの作成とスクリーニングを行い,融合蛋白に対して高い力価(1/10000)を持つ6系統のモノクロナル抗体を確立し分離精製した。しかしこれらの抗体はネイテイブな蛋白は認識しなかった。ネイテイブな蛋白は多くの糖鎖を持つ三量体であるが,原核細胞である大腸菌では糖鎖が付加されず,疎水性が強くなり立体構造が大きく異なったためと考えられる。
2.2F8抗体の結合部位の検討と2F8抗体による免疫組織学的検討
マクロファージはEDTA処理に抵抗して培養シャーレに接着するが,その接着を阻止する抗体2F8の抗原がスカベンジャー受容体であることが判明,オクスフォード大のグループと協力して2F8の結合部位をミュータント受容体を作成して検討した。2F8がリガンド結合部位欠失の受容体にはほとんど結合しないことから,スカベンジャー受容体による接着現象はリガンド依存性であると考えられた。この2F8抗体を用いて脳の免疫組織学的検討を行い,FGP細胞が2F8陽性であり,FGP細胞同志が連絡していることが確認された。現在発生に伴う変化を検討中である。これと平行してFGP細胞で代謝される物質の変化も免疫組織学的に明らかにした。

Research Products

• [Publications] Masao Mato et al.: "Mato's fluorescont granular perithelial cells express macrophage scavenger receptors mediate scavenger function and cause the nomowity of microartoris in the blain corlex" Proc.Natl.Acad.Sci.USA. (発表予定). (1994)
• [Publications] 本多 真 他: "マクロファージのスカベンジャー受容体と血管維持機構" 日本臨床. 8. 47-52 (1993)
• [Publications] 本多 真 他: "臨床医のための実験医学シリーズ「脳虚血」(発表予定)" 羊土社, (1994)