1993 Fiscal Year Annual Research Report
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05680544
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| Research Institution | Gifu University |
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Principal Investigator |
坂野 喜子 岐阜大学, 医学部, 助手 (50116852)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
岡野 幸雄 岐阜大学, 医学部, 教授 (10177066)
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| Keywords | ヒト血小板 / ホスホリパーゼC / G-蛋白質βγ |
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| Research Abstract |
ホスファチジルイノシトール特異的ホスホリパーゼC(PI-PLC)は情報変換酵素として重要な位置を占め、二つのセカンドメッセンジャー(イノシトール三リン酸とジアシルグリセロール)を産生する。本酵素はすでに9種類ものアイソザイムがクローニングされており多様性であり、アイソザイムの種類によりそれぞれの活性調節機構が異なることが多くの細胞系で明らかにされている。ヒト血小板は種々のアゴニスト刺激により迅速な応答を示し、イノシトールリン脂質代謝の活性化を検討した。特にトロンビン受容体とカップルしたPI-PLCの活性化機構を明らかにするために、ヒト血小板におけるPLCアイソザイムの分離・同定を目的として大量ヒト血小板からPLCの精製を試みた。サイトゾル画分からPLC-γ1、γ2、を分離精製した。他に未同定の2つの活性画分も単離した。また、膜画分からは3種類のPLCを分離し、その同定を抗体を用いたウエスタンブロッチング法により行なったところ、一つはPLC-β3であることが同定された。しかし、他の2種類のPLCは同定されなかった。
また、ウシ悩より分離精製したG蛋白質βγにより膜画分より精製したPLC-β3が特異的に活性化されることを見いだした。またPLC-β3はカルパインにより限定分解されて100kのフラグメントになるが、基のPLC-β3(150k)よりGβγによりさらに活性化されることを見いだした。この結果からヒト血小板には非常に強いカルパインが存在し、トロンビン刺激により活性化されることが示されているので、トロンビン刺激によるPLC-β3の活性化機構にカルパインによる限定分解の関与の可能性が示唆された。
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[Publications] Y.Banno: "Potentiation by cholera toxin of bradykinin-induced inositol phoaphate production" Biochem.J.292. 401-408 (1993)
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[Publications] T.Nakashima: "Phospholipase C activity in cerebrospinal fluid following subarachnoid hemorrhage related to brain damage" J.Cerebr.Blood Flow Metabol.13. 255-258 (1993)
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[Publications] Y.Banno: "Processing and secretion of lysosomal acid-glucosidase in Tetrahymena wild type and secretion-deficient mutant cells" J.Euk.Microbiol.40. 515-520 (1993)
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[Publications] A.Shariful: "Purification and characterization of phospholipase C preferentially hydrolysing phosphatidylcholine in Tetrahymena" J.Euk.Microbiol.40. 775-781 (1993)
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[Publications] Y.Banno: "Proteolytic modification of membrane-associated phospholipase C by calpain enhances its activation by G-protein in platelet" FEBS Lett.(in press). (1994)
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[Publications] S.Nakashima: "Advances in Molecular and Cell Biology “Platelet"" Role of signal-transducing phospholipase A,C and D in platelet activation. JAI Press INC. (in press), (1994)
