1994 Fiscal Year Annual Research Report
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05680637
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| Research Institution | KYOTO UNIVERSITY |
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Principal Investigator |
久保田 洋 京都大学, 理学部, 講師 (40115837)
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| Keywords | 細胞質分裂 / 母系効果突然変異 / アフリカツメガエル / 卵割 |
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| Research Abstract |
アフリカツメガエルの母系効果突然変異体(af)の雌が産む卵(af卵)の卵割溝は収縮しない。af卵の第一卵割が始まる前に、野生型の受精卵細胞質を顕微注入すると、af卵の第一卵割溝が収縮する。野生型卵細胞質を種々の生化学的手段で分画し濃縮後、af卵に顕微注入することにより、卵割溝収縮活性因子の精製を試みた。
硫安沈澱を行うと0-40%飽和で沈澱する分画に活性が見られた。これをDEAE sepharoseカラムで分画すると、260-280 mM NaClで溶出する分画に活性が見られた。活性分画を集めてもう1度DEAE sepharoseカラムで分離すると、3本の分画に卵割溝収縮因子の活性が存在した。この活性分画には分子量約31kDaと33kDaの2本のバンドが濃縮されていた。DEAE sepharoseカラムの活性分画をSuperose 12によるゲル濾過カラムと疎水性カラムでさらに精製した。その結果は、31kDaまたは33kDaの蛋白が卵割溝収縮因子の有力な候補であることを示唆した。今後もひき続き精製を行い、卵割溝収縮活性蛋白のアミノ酸配列の解析や抗体の作製を介して、遺伝子の単離を行う。
af突然変異を維持するために、多くのかけ合わせを行ったところ、新たな卵割異常卵を産む雌が見つかった。この雌が産卵した受精卵の半数弱は、第一卵割または第二卵割の収縮が不十分で、胚は多核体となり致死となる。第二卵割まで正常であっ胚は、色素パターンに異常が見られるものの、第三卵割以降も正常に卵割し正常発生を行う。一部の胚のみが致死になるので、この卵割異常の原因は、卵割溝の収縮に関係するmaternal productの不足または軽度の機能障害によるものと考えられる。
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[Publications] Hiroshi Y.Kubota: "A female sterile mutant,unfertilizable (uf),in Xenopus laevis." Developmental Biology. 158. 496-502 (1993)
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[Publications] Hiroshi Y.Kubota: "Oscillation of intracellular free calcium in cleaving and cleavage-arrested embryos of Xenopus laevis." Developmental Biology. 160. 512-518 (1993)
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[Publications] 久保田 洋: "アメリカツメガエルの細胞質分裂突然変異" 細胞. 26. 22-26 (1994)
