モノクローナル抗体による血栓性血小板減少性紫斑病モデルの発症メカニズ

1993 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 05770137
• Research Institution: Tohoku University
• Principal Investigator: 宮澤 正顕 東北大学, 医学部, 助手 (60167757)
• Keywords: モノクローナル抗体 / 血栓性血小板減少性紫斑病 / 血小板 / 内在性レトロウイルス / gp70

Research Abstract

血栓性血小板減少性紫斑病(TTP)は、血小板減少・溶血性貧血・腎障害を伴う原因不明の症候群で、現在まで再現性のある動物モデルがなく、その発症メカニズムは不明のままであった。我々は、ヒトの自己免疫症のモデル動物として広く用いられているMRL/lprマウスから新たに樹立した、内在性レトロウイルスenv遺伝子産物に特異的なモノクローナル抗体の中に、正常マウスへの移入によって血小板減少と全身の出血斑形成を起こす致死性のクローン36D1.1を見いだした。
このクローンのハイブリドーマ細胞を同系正常マウスに移入後経時的に静脈血を採血し、末梢血中に各血球数を調べた。その結果、細胞移入後3日目から5日目にかけて、血小板数のみが移入前に比較して有意に減少して行き、赤血球数・白血球数には有意な変化は見られなかった。一方、移入マウスの脾臓にはヘモジデリンの過剰沈着を認め、更に電子顕微鏡的に赤脾髄や肺の血管内に血小板の異常凝集像を認めた。これらin vivoの解析結果は、上記ハイブリドーマ移入マウスの体内で血小板が異常な凝集反応を起こして消費されていることを示唆した。そこで、正常マウス血漿から分離した血小板を用い、in vitroで上記ハイブリドーマの培養上清と反応させたところ、対照の抗体には見られない凝集反応を認めた。更に、分離血小板を用いた蛍光抗体法でも、上記抗体が血小板に結合することが示唆された。
この病原性ハイブリドーマの培養上清中に分泌された抗体分子は、IgGクラスに属するにも関わらずプロテインAに対する結合能が非常に弱かった。そこで、イオン交換法を用いて抗体分子を精製し、現在正常マウスへの静注移入による病変形成の有無を検討中である。

Research Products

• [Publications] 宮澤正顕: "内在性レトロウイルスの多様性とマウスの糸球体腎炎・血管炎" 炎症と免疫. 1(5). 412-420 (1993)
• [Publications] 宮澤正顕: "レトロウイルスに対する宿主免疫反応の生理と病理-認識抗原エピトープの構造と遺伝的制御-" 細胞. 25(14). 558-562 (1993)
• [Publications] 藤澤隆一: "MRL/lprマウス由来単クローン性抗gp70抗体による溶血性微小血管病変の誘発" 日本免疫学会総会、学術集会記録. 23. 653 (1993)
• [Publications] Masaaki Miyazawa: "Physiology and pathology of host immune responses eo exogenous and endogenous reroviruses-from gene fragments to epieopes" Tohoku Journal of Experimental Medicine. (印刷中). (1994)
• [Publications] 宮澤正顕: "現代病理学大系第6巻免疫" 中山書店(印刷中), (1994)
• [Publications] 宮澤正顕: "臨床医のための実験医学シリーズ自己免疫疾患" 羊土社(印刷中), (1994)