アルツハイマー病アミロイド前駆体蛋白のリソゾームにおける代謝過程の研究

1993 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 05770425
• Research Institution: Kyushu University
• Principal Investigator: 山田 猛 九州大学, 医学部, 助手 (50230462)
• Keywords: アルツハイマー病 / アミロイド / アミロイド前駆体蛋白 / 培養細胞

Research Abstract

[目的]アルツハイマー病(AD)の脳に沈着するbeta蛋白(betaP)が、その前駆体蛋白(APP)から生成される過程を検討する。
[方法]APPの分泌過程を阻害するために、APPsecretaseによるAPPの切断部位のリジンをバリンに置換したAPPcDNA(APP_<K-V>)を作成した。APPのライソゾームへの輸送を促進するために、APPのC末部分をライソゾーム膜蛋白Lamp-1のC末部分にあるライソゾームへの輸送シグナル配列に置換したハイブリッドcDNA(APP-lamp)を作成した。ヒトグリオーマ細胞U251に改変APPcDNAを導入し、stable transformantを得て、ノーザン、ウエスタンブロットおよび免疫沈降法による解析を行った。
[結果]両導入遺伝子の発現量は、mRNA、蛋白レベルとも内因性APPの約10倍認められ、大量に発現されていた。培養上清のAPPN末抗体によるウエスタンブロット解析では、APP_<K-V>はAPPに比して分泌が低下していたが、APP-lampでは明らかな分泌低下は認められなかった。細胞のAPPC末抗体によるウエスタンブロット解析では、APP_<K-V>はAPPに比してより長いC末断片が多く生成されていた。培養上清の抗beta抗体による免疫沈降解析では、APP_<K-V>およびAPPとも4kdのbeta蛋白と考えられるバンドが検出されたが、特に量的な差は認められなかった。
[結論]APPのいわゆるalpha-secretionを阻害するだけでは、betaPの産生増加は起こらないと考えられた。

Research Products

• [Publications] Yamada,T.: "Neuron-specific spelicing of the Alzheimer amyloid precursor protein gene in a mini-gene system" Biochem Biophys Res Commun. 195. 442-448 (1993)
• [Publications] Ohyagi,Y.: "Hemoglobin as a novel protein debelopmentally regulated in neurons" Brain Res. 635. 323-327 (1994)