1994 Fiscal Year Annual Research Report
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06044071
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| Research Institution | Tokyo Medical and Dental University |
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Principal Investigator |
井川 洋二 東京医科歯科大学, 医学部, 教授 (40085618)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
グレゴリー ロングモア ワシントン大学, 医学部, 助教授
山村 康子 東京医科歯科大学, 医学部, 助手 (50146809)
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| Keywords | エリスロポエチン / エリスロポエチン受容体 / サイトカインレセプター / シグナル伝達 / JAKキナーゼ / 赤白血病 |
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| Research Abstract |
活性型K-Rasの導入によりエリスロポエチン受容体下流のシグナル伝達経路が活性化され、エリスロポエチン依存性増殖を示すようになったT細胞株CTLL-2由来の細胞においては、エリスロポエチンの刺激に伴い、125kDa及び160kDaのチロシンリン酸化蛋白質がエリスロポエチン受容体と会合することを明らかにした。種々の抗JAKキナーゼファミリー抗体を用いたウエスタンブロッティング解析により、上記125kDaチロシンリン酸化蛋白質はJAK3キナーゼであることを見出した。エリスロポエチン受容体を導入したB細胞株では、エリスロポエチン刺激に伴い、JAKファミリーに属するJAK2キナーゼがエリスロポエチン受容体と会合しチロシンリン酸化を受けることが報告されているが、本研究により、エリスロポエチン受容体をエリスロポエチンで刺激すると、JAK3キナーゼもチロシンリン酸化を受けることが明らかとなった。さらに、細胞表面蛋白質のビオチン化とそれに続く抗エリスロポエチン受容体抗体を用いた免疫沈降実験により、160kDaのビオチン化蛋白質がエリスロポエチン受容体と共沈することが見出されており、上述の160kDaチロシンリン酸化蛋白質は細胞表面蛋白質であることが強く示唆された。フレンドウイルス及びその腫瘍原性遺伝子で誘導された種々の赤白血病細胞株においてもエリスロポエチン受容体とJAK2キナーゼ及び125kDa、160kDaのチロシンリン酸化蛋白質とが会合することが見出されており、これら蛋白質のエリスロポエチンシグナル伝達及び赤白血病誘発への関与が強く示唆された。
同エリスロポエチン依存性CTLL-2由来の細胞株では、従来の低親和性エリスロポエチン受容体に加えて、高親和性受容体が新たに形成されていることを見出した。今後、エリスロポエチン受容体のサブユニット構造を解析するための実験系として同細胞系の利用が期待されてる。
さらに、cDNAライブラリーサブトラクション法により、上記160kDaチロシンリン酸化蛋白質の遺伝子の単離を試みているが、その過程で同細胞系で特異的に活性化されているセリンプロテアーゼ、及びいくつかの未同定の蛋白質をコードするcDNAが得られている。現在、それらの機能解析を試みている。
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Research Products
(5 results)
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[Publications] Yamamura,Y.,Noda,M.,and Ikawa,Y.: "Erythropoietin receptor and interleukin-2 receptor use different downstream signaling pathways for proliferation and apoptosis-block." Leukemia. 8. 107-110 (1994)
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[Publications] Yamamura,Y.,Noda,M.,and Ikawa,Y.: "Activated Ki-Ras complements erythro-poietin signaling in CTLL-2 cells,inducing tyrosine phosphorylation of a 160-kDa protein." Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 91. 8866-8870 (1994)
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[Publications] Xu,X.,Yamamura,Y.,Tsukada,T.,Yoshida,M.A.,Senda,N.,Nagayoshi,M.,Ikeuchi,T.,and Ikawa,Y.: "A mouse erythroleukemia cell line possessing F-SFFV gp55 transgene and temperature-sensitive mutant p53.gene." Jpn.J.Cancer Res.(1995)
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[Publications] Pharr,P.N.,Ogawa.M.,Hofbauer,A.,and Longmore,G.D.: "Expression of an activated erythropoietin or a colony-stimulating factor 1 receptor by pluripotent progenitors enhances colony formation but dose not induce" Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 91. 7482-7486 (1994)
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[Publications] Longmore,G.D.,Pharr,P.N.,and Lodish,H.F.: "A constitutively activated erythropoietin receptor stimulates proliferation and contributes to transformation of multi-potent,committed nonerythroid and erythroid progenitor cells." Mol.Cell.Biol.14. 2266-2277 (1994)
