1994 Fiscal Year Annual Research Report

修飾ヌクレオチドによる生体環境場における情報伝達系の光制御

Research Project

Project/Area Number	06239111
Research Institution	Tokai University
Principal Investigator	佐々木政子東海大学, 開発技術研究所, 教授 (00090514)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	小林正美東京大学, 工学部, 助手 (70234846) 川久保洋東海大学, 医学部, 講師 (70204691) 小宮山真東京大学, 工学部, 教授 (50133096) 藤田斉東海大学, 医学部, 助教授 (10096258)
Keywords	修飾ヌクレオチド / 光駆動型薬剤 / リポソーム / αーターチエニル / リソソーム / エンドサイトーシス
Research Abstract	本研究は遺伝子DNAあるいは外来遺伝子に起因する病気の発現を、光化学反応を利用して異常遺伝子を確実にブッロックすることを狙った光化学的遺伝子発現抑制法の開発のための基礎研究である。本年度は、光駆動型薬剤として光駆動部位を付加したオリゴヌクレオチド(F-DNA)を合成し、反応場となる細胞への導入手法と細胞内移行プロセスを検討し、次の結果を得た。1)調製リポソームは直径約100nmの多層膜である。リポソームに包埋されたF-DNAの漏出率は2%/h(37℃)で、リポソームの安定性は良好と判明した。2)F-DNA/リポソームの蛍光は細胞内のリソソーム様小器官と核小体から検出され、F-DNAは細胞内のこれらの部位に親和することを明らかにした。核小体内に観測されるF-DNAの蛍光は時間と共に指数関数的に減少した。この蛍光の減少は、F-DNAの蛍光がF-DNAの水溶液中では励起に対して極めて安定なことから、F-DNAが核小体内に存在する一本鎖DNAかrRNAに光結合したためと考察した。3)αーターチエニル標識リポソームの蛍光はリソソーム様小器官から検出されたが、細胞膜からは検出されなかった。このことはリポソームの細胞内移行過程がエンドサイトーシスによることを強く示唆した。4)無蛍光基質フルオレセイン-(β-D-ガラクトピラノシド)(略 FDG)はリソソームマーカー酵素β-ガラクトシダーゼ(略 β-gal)活性により蛍光物質フルオレセインを生成する。F-DNAの細胞内移行過程がリソソームを経由するかどうかを明らかにするため、FDG包埋リポソームを調製し細胞内の親和部位の蛍光観察を行った。フルオレセインの蛍光はリソソームと核小体から検出され、F-DNA/リポソームの細胞内の蛍光分布と一致した。フルオレセインの蛍光が核小体内に観測されたことから、F-DNA/リポソームはリソソーム内で多層膜リポソームの崩壊過程をへて核小体へ移行したと考察した。

Research Products
(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] M.Sasaki et al.: "An Increase in the Global Solar Ultraviolet-B Irradiance at 35N in Japan since 1990." Journal of Geomagnetism and Geoelectricity. 46. 827-834 (1994)
[Publications] M.Watanabe and M.Sasaki et al.,: "Introduction of fluorescein-labeled oligonucleotides into cultured human keratinocytes and detection of thier affinity---" Photomedicine and Photobiology. 16. in press (1994)
[Publications] H.Fujita,T.Kumamoto and M.Sasaki: "Photochemical and photobiological properties of a newly synthesized hydrophilic derivative of terthiophene." Photomedicine and Photobiology. 16(in press). (1994)
[Publications] M.Kobayashi and M.Sasaki et al.,: "Photocleavage of DNA by Chlorophyll-and Porpyrin-Derivatives." Photomedicine and Photobiology. 16(in press). (1994)
[Publications] M.Kobayashi and M.Sasaki et al.,: "Oxygen-Indipendent Photocleavage of DNA,and Uptake of Chlorophyll Derivatives by Cellular Nuclei and Mitochondria." J.Clinical Laser Medicine & Surgery. 12. 133-138 (1994)
[Publications] 佐々木政子: "最近の光環境の変化" Journal of Japanese Society of Hospital Pharmacists. 30. 5-18 (1994)

1994 Fiscal Year Annual Research Report

修飾ヌクレオチドによる生体環境場における情報伝達系の光制御

Principal Investigator

佐々木 政子 東海大学, 開発技術研究所, 教授 (00090514)

Research Products

[Publications] M.Sasaki et al.: "An Increase in the Global Solar Ultraviolet-B Irradiance at 35N in Japan since 1990." Journal of Geomagnetism and Geoelectricity. 46. 827-834 (1994)

[Publications] M.Watanabe and M.Sasaki et al.,: "Introduction of fluorescein-labeled oligonucleotides into cultured human keratinocytes and detection of thier affinity---" Photomedicine and Photobiology. 16. in press (1994)

[Publications] H.Fujita,T.Kumamoto and M.Sasaki: "Photochemical and photobiological properties of a newly synthesized hydrophilic derivative of terthiophene." Photomedicine and Photobiology. 16(in press). (1994)

[Publications] M.Kobayashi and M.Sasaki et al.,: "Photocleavage of DNA by Chlorophyll-and Porpyrin-Derivatives." Photomedicine and Photobiology. 16(in press). (1994)

[Publications] M.Kobayashi and M.Sasaki et al.,: "Oxygen-Indipendent Photocleavage of DNA,and Uptake of Chlorophyll Derivatives by Cellular Nuclei and Mitochondria." J.Clinical Laser Medicine & Surgery. 12. 133-138 (1994)

[Publications] 佐々木 政子: "最近の光環境の変化" Journal of Japanese Society of Hospital Pharmacists. 30. 5-18 (1994)

佐々木政子東海大学, 開発技術研究所, 教授 (00090514)

[Publications] 佐々木政子: "最近の光環境の変化" Journal of Japanese Society of Hospital Pharmacists. 30. 5-18 (1994)