1994 Fiscal Year Annual Research Report
SV40 large T抗原に結合する筋細胞増殖抑制因子の同定
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06247202
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| Research Institution | Chiba University |
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Principal Investigator |
遠藤 剛 千葉大学, 理学部, 助教授 (30194038)
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| Keywords | 筋細胞分化 / 脱分化 / SV40 large T抗原 / Rb / MyoD / myogenin / 筋細胞融合 / 低分子量G蛋白質 |
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| Research Abstract |
誘導性のプロモーターにつないだSV40 large T抗原遺伝子をマウス骨格筋細胞株C2にトランスフェクトして得た形質転換細胞株C2SVTでは,最終分化をした筋管細胞にlarge Tを発現させると,不可逆的にG0期に停止していると考えられていた細胞が脱分化をして,細胞分裂がもたらされる.この細胞周期の再開の機構を解明するために,large TがRb以外に増殖抑制能をもつMyoDやmyogeninに結合するかどうかを調べた.その結果,大腸菌に発現させたGST-MyoDおよびGST-myogeninは,バキュロウイルス/Sf9細胞の系で発現させたlarge Tと結合することが示された.現在,MyoDあるいはmyogeninとlarge Tがそれぞれのどの領域で結合するか,またこの結合によりMyoD,myogeninの増殖抑制機能が阻害されるかどうかを調べている.
骨格筋細胞は最終分化の過程で細胞融合により多核の筋管細胞を形成する.この細胞融合にかかわる蛋白質の同定を試みた.まず,いくつかのウイルス表面にある融合蛋白質と,精子と卵の融合に必要な精子細胞膜上にある融合蛋白質の融合ペプチドの相同性を利用して,この部分に対する抗体を作製した.この抗体を用いて,筋細胞のλZAPII cDNA発現ライブラリーをスクリーニングすることにより,3つのクローンを得た.そのうちの1つには,上記の融合ペプチドとの相同性がみられたので,融合ペプチドをもつタンパク質が筋細胞にも存在する可能性が示された.また低分子量G蛋白質のRho/Racファミリーの既知の機能を考慮すると,筋特異的Rho/Racファミリーが存在すればそれは筋原線維形成や筋芽細胞融合に関与していると推定される.そこで,それらのcDNAクローニングを行なった.その結果,筋細胞と脳に特異的に発現しているRho/Racファミリーのクローンが得られた.
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Research Products
(6 results)
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[Publications] T.Endo: "SV40 large T inhibits myogenic differentiation partially through inducing c-jun." J.Biochem.112. 321-329 (1992)
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[Publications] T.Endo: "Retinoblastoma gene product Rb accumulates during myogenic differentiation and is deinduced by the expression of SV40 large T antigen." J.Biochem.112. 427-430 (1992)
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[Publications] K.Fukami: "α-Actinin and vinculin are PIP_2 binding proteins involved in signaling by tyrosine kinase." J.Biol.Chem.269. 1518-1522 (1994)
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[Publications] K.Maruyama: "A partial connectin cDNA encoding a novel type of RSP motifs isolated from chicken embryonic skeletal muscle." J.Biochem. 115. 147-149 (1994)
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[Publications] Y.Ohkubo: "SV40 large T antigen reinduces the cell cycle in terminally differentiated myotubes through inducing Cdk2,Cdc2,and their partner cyclins." Exp.Cell Res.214. 270-278 (1994)
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[Publications] N.Hashimoto: "Phosphorylation of a proline-directed kinase motif is responsible for structural changes in myogenin" FEBS Lett.352. 236-242 (1994)
