1994 Fiscal Year Annual Research Report
哺乳類細胞のDNA複製に関与するDNAヘリカーゼの分子遺伝・生化学的研究
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06247204
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
榎本 武美 東京大学, 薬学部, 助教授 (80107383)
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| Keywords | DNAヘリカーゼ / DNA複製 / プライマーRNA合成 / 一本鎖DNA結合蛋白 / 哺乳類細胞 / 温度感受性変異株 / cDNA |
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| Research Abstract |
DNA複製という細胞増殖に必須な基本的過程が進行するためには、二本鎖DNAが巻戻されて一本鎖になることが必要である。この過程は二本鎖DNA巻戻し酵素(DNAヘリカーゼ)により遂行される。昨年度、DNA複製の温度感受性変異株を分離し解析することにより、DNAヘリカーゼBが哺乳類細部のDNA複製に関与するDNAヘリカーゼであることを明らかにした。
原核細胞やウイルスのDNA複製に関与するDNAヘイカ-ゼの多くのものがプライマーゼ活性を促進することから、本年度はDNAヘリカーゼBのDNAプライマーゼ活性に及ぼす影響を調べるとともに、そのcDNAのクローニングを試みた。
1、マウスFM3A細胞から、DNAヘリカーゼB、DNAポリメラーゼα-プライマーゼ、一本鎖DNA結合蛋白質(RP-A)を精製し、DNAポリメラーゼα-プライマーゼのプライマーゼ活性に及ぼすDNAヘリカーゼB、RP-Aの影響を調べたところ、DNAヘリカーゼBはプライマーゼ活性を顕著に促進し、RP-Aは阻害することがわかった。さらに、RP-Aにより阻害されたプライマーゼ活性はDNAヘリカーゼBにより回復することから、DNAヘイカ-ゼBが原核細胞やウイルスのDNA複製に関与するDNAヘリカーゼと同様な作用をすることが明らかになり、機能の面からも、DNAヘリカーゼBがDNA複製に関与するDNAヘリカーゼであることを示すことができた。
2、DNAヘリカーゼBを精製してアミノ酸配列を決め、そのアミノ酸配列をもとにcDNAのクローニングを試み、N末端の一部を除きcDNAをクローニングすることができた。
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[Publications] Kimura,K.: "Growth state-and cell cycle-dependent fluctuation in the expression of two forms of DNA topo II and possible specific modification of the higher molecular weight form in the M phase." Journal of Biological Chemistry. 269. 1173-1176 (1994)
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[Publications] Seki,M.: "Purification of two DNA-dependent adenosinetriphosphatases having DNA helicase activity from HeLa cells and comparison of the properties of the two enzymes." Journal of Biochemistry. 115. 523-531 (1994)
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[Publications] Masutani,C.: "Purification and cloning of a nucleotide excision repair complex involving the xeroderma pigmentosum group C protein and a human homologue of yeast RAD23." EMBO Journal. 13. 1831-1843 (1994)
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[Publications] Kimura,K.: "Identification of the nature of modification that causes the shift of DNA topoisomerase IIβ to apparent higher molecular weight forms in the M phase." Journal of Biological Chemistry. 269. 24523-24526 (1994)
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[Publications] Seki,M.: "Molecular cloning of cDNA encoding human DNA helicase Q1 which has homology to Escherichia coli Rec Q helicase and localization of the gene at chromosome 12p12." Nucleic Acids Research. 22. 4566-4573 (1994)
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[Publications] Seki,M: "Characterization of DNA synthesis and DNA-dependent ATPase activity at the restrictive temperature in temperature-sensitive mutants,tsFT848 cells with thermolabile DNA helicase B." Molecular and Cellular Biology. 15. 165-172 (1995)
